微生物来源的酶抑制剂的筛选课件.pptVIP

微生物来源的酶抑制剂 一、酶抑制剂研究概况 （一）酶抑制剂微生物源 主要来源：放线菌（链霉菌属） 有局限性（分离方法、分类方法） 其它：真菌、细菌、藻类和极端环境的微生物 极端环境 耐高温、高压：-196℃,300 ℃、-253 ℃ 高盐：32﹪ 干燥 耐酸、耐碱：pH0.5、 pH10.7 抗辐射：人 1000R， 数万，75万 抗静水压：数百至数千个大气压 （二）酶抑制剂产品 1969 年Umezawa 首先报道从链霉菌中寻找到低分子量酶抑制剂并预见到它们的临床用途 发现许多酶抑制剂在医药、护肤化妆品和农业上都有着广泛的用途 具有降血脂作用的酶抑制剂 具有降血压作用的酶抑制剂 具有抗血栓作用的酶抑制剂 具有抗肿瘤作用的酶抑制剂 HIV复制抑制剂 具有抗炎症作用的酶抑制剂 其他一些酶抑制剂 （三）酶抑制剂的筛选 寻找新药取得成功基于以下诸因素： 微生物分离 筛选模型的有效性 发酵条件 所需的化合物的分离 其中关键在于建立有效的筛选模型 β-内酰胺酶抑制剂筛选模型 产色头孢菌素法：Nitrocefin(头孢硝噻吩) 是一种反应性很强的头孢菌素，易被β-内酰胺酶水解，颜色由黄色转变为红色，提取物或发酵液中如有抑制剂存在，则Nitrocefin 颜色不变 HMG-CoA 还原酶抑制剂筛选模型 应用ELISA法： 将已知的HMG-CoA 还原酶抑制剂Compactin（通用名美伐他丁）与蛋白质交联，其交联物免疫动物获得抗体。酶标抗体作为“探针”在发酵液中定向寻找目的物 （四）国内酶抑制剂研究概况 国内酶抑制剂方面的研究始于70 年代末 福建省微生物研究所在凝血酶抑制剂、淀粉酶抑制剂、糜蛋白酶抑制剂、β-内酰胺酶抑制剂、抑胃酶剂、胃蛋白酶抑制剂、HMG-CoA 还原酶抑制剂和黑色素生物合成抑制剂等方面的研究成果显著。 上海医药工业研究院在80 年代初就开始与日本东京微生物化学研究所、日本麒麟啤酒和美国辉瑞公司等合作从土壤中寻找新的由微生物产生的生理活性物质的研究。 相继建立了淀粉酶抑制剂、XIIIα抑制剂、5α-睾丸酮还原酶抑制剂和胆固醇生物合成酶抑制剂等的筛选模型,其中筛选获得的HMG-CoA 还原酶抑制剂普伐他丁的菌种和工艺技术已转让给生产厂。 国内研究最为突出、最有代表性的是HMG-CoA 还原酶抑制剂。如四川抗菌素工业研究所、中国医学科学院医药生物技术研究所、北京大学、无锡轻工大学等均在进行HMG-CoA 还原酶抑制剂的研究。 国内有关酶抑制剂方面的研究基本上还是借鉴模仿国外研究,缺乏创意性的进展。 β-内酰胺酶抑制剂 细菌产生耐药性的机制： 1）靶位结构或亲和力改变 2）细菌细胞膜通透性改变 3）细胞膜主动外排机制 4）细菌产生灭活酶（钝化酶）----最主要 β－内酰胺酶 催化水解? -内酰胺环的酰胺腱。 在革兰氏阳性中 β-内酰胺酶相对较为简单，只有两种：青霉素酶类，头孢菌素酶类 在革兰阴性菌 一种为分子生物学的分类，根据末端氨基酸序列及编码基因的位点来分，可分为四类（Ambler分类） ：A类，为丝氨酸酶，由质粒编码B类，为金属酶，由染色体编码C类，为丝氨酸酶，由染色体编码D类，为丝氨酸酶，由质粒编码 另一种为临床上较为实用的分类方法，是根据各种酶的底物及抑制剂类型分成五型（Bush-J-M分类） ： ①CEP-N酶， ②PEN-Y酶， ③BSD-Y酶， ④EBS-Y酶即ESBLS（超广谱酶） ⑤金属酶。  自1976 年以来已开发上市的β内酰胺酶抑制剂有 1）棒酸（克拉维酸 ）（clavulanic acid） 2）舒巴坦（sulbactam） 3）他唑巴坦（tazobactam） 抑酶作用特点：自杀性酶抑制剂 一些复方制剂： 奥格门汀(Augmentin)（安灭菌）：克拉维酸钾1＋阿莫西林2 优立新(Unasyn)：舒巴坦钠1＋氨苄西林钠2 舒哌酮(sulperazone)：舒巴坦钠1＋头孢哌酮钠1 他唑西林( Tazocillin) ：他唑巴坦钠1＋哌拉西林钠8 a一糖苷酶抑制剂 a一糖苷水解酶把淀粉等多糖水解呈葡萄糖，供人体吸收。 德国、日本已筛选出30多种， 德国拜尔公司开发的阿卡波糖（拜糖苹）、 米格列醇 日本武田公司开发的伏格列波糖 在糖尿病治疗中的应用 阿卡波糖（arcabose） 上世纪7 0 年代初， 从放线菌A c e t i n o p l a d e s u t a h e n s i s 发酵液中分离得到 阿卡波糖（arcabos