基于微核的DNA损伤修复能力检测方法.DOC

基于微核的DNA损伤修复能力检测方法 徐晓文1，张光辉1，郑国巧1，孙原1，高靖1，焦洁1，夏昭林1@ 1作者单位：200032上海，复旦大学公共卫生学院职业卫生与毒理学教研室，公共卫生安全教育部重点实验室 @通信作者：夏昭林，E-mail：zlxia@shmu.edu.cn 摘要 【目的】 环境中某些理化因素能引起DNA损伤进一步导致癌症或其他疾病的发生，机体DNA 修复系统能识别DNA 序列中的损伤部位，并通过多种修复途径在一定限度内修复各种内、外源性因素引起的DNA 损伤，维持DNA 和基因组的完整性。DNA修复能力既可作为效应指标,也可视为易感性标志物。因此，综合考虑、识别个体的遗传损伤及其修复能力，对推断个体肿瘤易感性、预测肿瘤发生风险具有重要意义。本研究旨在提供一种检测、评价DNA修复能力的方法。 【材料和方法】 取研究对象外周抗凝血1ml接种于培养基，37℃培养24h后以博莱霉素（bleomycin，BLM，终浓度1μg/ml）诱导外周血淋巴细胞DNA损伤(即双核微核形成)。将其等分为两份，一份立即加入DNA修复酶抑制剂3-氨基苯甲酰胺（(3-aminobenzamide, 3AB，终浓度1.25mmol/L）染毒30min，另一份作为对照，继续培养20h后加入细胞松弛素B（终浓度为6μg/ml），28h后收获细胞。细胞经低渗，固定后滴片，玻片在室温下自然晾干后，用Gimsa染色。显微镜下计数1000个双核细胞中的微核总数。以CB微核作为观察终点，计算得出3AB指数。微核率=微核数/观察细胞数×1000‰，3AB指数=（加3AB的微核率﹣不加3AB的微核率）/加3AB的微核率。3AB指数反映了个体的DNA修复能力，3AB指数越大，则说明个体的DNA修复能力越高。为了验证此方法的可行性，我们分别选取某工厂氯乙烯接触工人、该厂不接触氯乙烯及其他毒物的工人及某高校教职工各5名检测其DNA修复能力。 【结果】 不同受试对象结果显示不加BLM和3-AB组、加BLM组与加BLM组和3-AB组微核数依次升高，与预期完全一致。不同环境暴露条件的人群其DRC存在差异，其中氯乙烯接触组为0.12±0.07，内对照组为0.40±0.01，外对照组为0.51±0.05。此外，三组的微核率分别为(8.20±4.82)‰, (3.40±1.14)‰和(1.20±0.84)‰，可见DNA修复能力越大，微核率越低。 【结论】 本方法以微核为观察终点更为客观，易于获得，重现性好，提供了一种检测机体DNA损伤修复能力的新方法，从而有助于推断个体肿瘤易感性、预测肿瘤发生风险。