环氧化酶-2在胰腺癌细胞SW1990中扩增及其表达的研究-外科学专业论文.docxVIP

环氧化酶一2基因在胰腺癌细胞SWl 环氧化酶一2基因在胰腺癌细胞SWl 990中 扩增及其表达的研究 摘要 研究背景和目的 胰腺癌是消化道常见的恶性肿瘤，约占全身恶性肿瘤的1％一3％，并且发病率有 逐年增长的趋势。胰腺癌的恶性程度很高，治疗效果欠佳，寻找有效的治疗方法 是胰腺癌研究领域的热点。环氧化酶．2(cOx．2)是一种膜结合的糖蛋白，广泛 存在于人体各种组织器官，基础状态下表达非常低。在各种刺激因子诱导下表达 可以明显增高。它的作用是催化花生四烯酸转换成为前列腺素和血栓素等物质。 近年来有研究发现，环氧化酶一2可以促进细胞生长，抑制肿瘤细胞凋亡的发生； 环氧化酶一2抑制剂在体内和体外实验中可减少肿瘤细胞迁移、粘附和肿瘤侵袭。 研究证实，环氧化酶．2在胰腺癌的病理进展过程发挥着重要作用。近年来有研究 发现一些小的双链的RNA可以高效的、特异的阻断体内特定的基因表达称为 RNA干扰。因此利用RNA干扰来阻断环氧化酶．2在胰腺癌的作用将为探索治疗 胰腺癌提供一个新的途径。本实验通过扩增环氧化酶．2基因，并且测定在细胞因 子刺激作用下胰腺癌细胞SWl990环氧化酶．2的表达情况，为探讨是否可以将胰 腺癌细胞系SWl990作为体外细胞实验对象，为以后进一步研究利用RNA干扰 的方法通过抑制环氧化酶-2基因表达来治疗胰腺癌体外细胞实验研究打下基础。 方法 体外培养胰腺癌细胞SWl990；提取细胞总RNA，将其转录为eDNA，设计 引物，以转录的eDNA为模板PCR扩增环氧化酶-2基因，O．8％琼脂糖胶跑胶鉴 定。分别用白介素．1B，脂多糖刺激细胞；裂解细胞后测定各样品蛋白质浓度， 用Western Blot的方法测定胰腺癌细胞SWl990在白介素．1B刺激，脂多糖刺激 以及无刺激条件下环氧化酶．2蛋白的表达量。 结果 从胰腺癌细胞SWl990中可以扩增出环氧化酶一2的基因；胰腺癌细胞 SWl990有环氧化酶．2的蛋白表达，受到白介素．1B和脂多糖刺激后表达增高， 且受白介素．1B刺激增高更为明显。 结论 胰腺癌细胞SWl990有环氧化酶一2蛋白表达，在白介素-lB和脂多糖刺激下 表达增高，尤以受白介素．1B刺激后表达增高更为明显，胰腺癌细胞SWl990可 以用于进行进一步的利用RNA干扰抑制环氧化酶基因表达治疗胰腺癌的体外细 胞实验研究。 Study Study on the expression and amplification of cyclooxygenase-2 gene in pancreatic cancer cell line SWl990 Abstract Objective：．The mortality rate of pancreatic carcinoma remains hiIgh． A major goal in the area of cancer prevention and treatment is to make rational use of defined molecular targets in order to block cacinogenesis． Cyclooxygenase catalyzes the rate—limiting step in prostaglandin production；the inducible isform，cyclooxygenase一2，was appeared to overexpress in pancreatic carcinoma，which play several roles in carcinogenesis． In the study,we investigate the protein of the Cyclooxygenase一2 expression in Pancreatic cancer cell line SWl 990 in order to lay the foundation for further experiment of RNA interference to treat pancreatic carcinoma． —Meth—ods：Culture the cell line SWl990 and maintain in RPMI 1640 in vitro；Extract the total RNA of the cell line SWl 990．The primer of cox-2 was designed and synthesized；Cox一2 gene was amplified． Stimulate cell line SWl990 by interleukin