四环素类抗生素第六节氨基糖苷类抗生素的生产课件.ppt

第三章 发酵工程制药 发酵工程制药概述 抗生素类药物概述 β-内酰胺抗生素的生产 大环内酯类抗生素的生产 四环素类抗生素的生产 氨基糖苷类抗生素的生产 四环素类抗生素的生产 四环素类抗生素的结构及特性 四环素类抗生素的理化特性 四环素的发酵生产 四环素的提取和精制 四环素类抗生素的结构及特性 1、结构 四环素类抗生素是放线菌产生的一类广谱抗生素，包括金霉素（Chlortetracycline）、土霉素（Oxytetracycline）、四环素（Tetracycline）及半合成四环素类抗生素。具有十二氢化并四苯基本结构。该类药物有共同的A、B、C、D四个环的母核，仅在5、6、7位上有不同的取代基。 四环素类抗生素的结构及特性 2、分类 天然类 金霉素、土霉素、四环素、地美环素（去甲金霉素） 半合成类 多西环素、美他环素、米诺环素等 四环素类抗生素的结构及特性 3、抗菌谱及药理特点 广谱，细菌（除铜绿假单胞菌），螺旋体、支原体、立克次体、衣原体。 抑制细菌生长、作用较弱（不及青霉素类或链霉素类）。 耐药较严重 急性毒性很低 副作用多 四环素类抗生素的结构及特性 4、作用机制 四环素能够与原核细胞中的16S rRNA （30S 核糖体的组成部分）结合，从而阻碍了氨酰tRNA与16S rRNA的结合，使得由mRNA到蛋白质的翻译过程无法进行。四环素对真核细胞有一定毒性，一般认为是四环素干扰了真核细胞中线粒体30S 核糖体的功能。 四环素类抗生素的理化特性 1、黄色结晶粉末、味苦。 2、两性化合物 3、溶解性 等电点pH=5.4（在等电点时，四环素呈游离碱的形式，溶解度最小）。 在pH=4.5～7.2，四环类抗生素难溶于水。 不易溶于水，其盐水溶性也差，故不易配制成注射液。 能与各种酸、碱形成盐，盐酸盐最重要。（四环素、金霉素的理论效价以盐酸盐为标准，土霉素以游离碱为标准，1 mg = 1000 U） 四环素类抗生素的理化特性 4、能形成螯合物与复合物 （1）在碱性的溶液中，与金属离子形成螯合物沉淀，如：钙、镁、钡离子（吸收受乳制品及二、三价阳离子影响——配伍禁忌）。 （2）与其他物质形成复合物沉淀，如：长烃链的季铵碱、尿素、氯化钙等 　复合物不溶于水；溶于有机溶剂，分离成四环素和尿素。 四环素 尿　素 四环素—尿素复合物 四环素 尿　素 四环素类抗生素的理化特性 5、稳定性 四环素类药物在干燥条件下稳定。 但遇光色加深。在酸性或碱性溶液中不够稳定，或药效显著降低、或产生毒性（密闭、防潮、避光保存）。 ★ 四环素的发酵生产 （一）孢子制备 1、生产菌种 金色链霉菌（Streptomyces aureofaciens） 生绿链霉菌（S．viridifaciens）、佐山链霉菌（S．sayamaensis）等也能产生四环素。 金色链霉菌 抑氯剂 四环素 NaCl 金霉素 四环素的发酵生产 2、控制要点 　（1）进行简单的自然分离， 　（2）节约砂土管的用量。 　　麸皮琼脂斜面，36℃，4～5d （二）种子制备 　　　30～32℃，24～27h 四环素的发酵生产 （三）发酵生产 　1、培养基 　　（1）碳源 　　　常用：淀粉（玉米淀粉、燕麦粉、土豆粉）、可溶性淀粉、葡萄糖、糖蜜、油脂。 　　　控制：玉米淀粉酶解液。 　　（2）氮源 　　　常用：花生饼粉、黄豆饼粉、棉籽饼粉、(NH4)2SO4、氨水、尿素等，很少用价格昂贵的蛋白胨。 　影响因素： 氨基酸能刺激金色链霉菌生产四环素或金霉素； 过量的氮源抑制四环素的合成。 控制：氨基酸浓度100～200mg/L。 四环素的发酵生产 （3）抑氯剂 　　　影响因素：阻止金霉素的合成，促进四环素的合成，但浓度较大时对产生菌有毒性。 　　　控制：抑氯剂与NaBr并用；抑氯剂加到种子罐。 （4）无机盐 　　影响因素： 磷酸盐对菌体生长和抗生素的合成有很大影响； 镁盐、钙盐促进四环素生物合成； 铁离子及其他无机离子，抑制四环素的生物合成。 　　控制：无机磷含量110～120mg/ml；控制铁离子及其他无机离子浓度，加CaCO3。 四环素的发酵生产 2、发酵条件 　（1）培养温度 前期温度高有利于菌丝繁殖， 中后期降温是为了减缓产生菌的代谢速度，使菌丝自溶期延迟。 控制：变温控制31℃-30℃-29℃ 　（2）溶氧 菌种对溶氧极为敏感。 四环素的发酵生产 （3）补料 　①C、N源 　②pH值 金色链霉菌生长，最适pH值6.0～6.8 合成四环素，最适pH值5.8～6.0 控制：发酵不同阶段，加入葡萄糖或淀粉和氨水控制所需pH值。 　③消泡剂 影响因素：油中酸价和过氧化物过多，影响四环素生物合成。 控制：油的质量 （4）发酵时间：通常为8d。 ★ 四环素的提取和精制 发酵液 滤液 加草酸及黄血酸盐、硼