建立利用萤光素酶快速检测细胞活性的方法-华东师范大学学报自然.PDF

第 期 华东师范大学学报（自然科学版） ４ Ｎｏ．４ 　 　 年 月 （ ） ２０１２ ７ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥａｓｔＣｈｉｎａＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔ ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ Ｊｕｌ．２０１２ ｙ 文章编号： （ ） １０００５６４１２０１２０４００００００ 建立利用萤光素酶快速检测细胞活性的方法 祝静静， 鲍秋颖， 王宇萌， 夏 钢 　 　 　 　 （华东师范大学 脑功能基因组学教育部重点实验室，上海市脑功能基因组学重点实验室，上海　２０００６２） 摘要：运用 ＰＣＲ的方法从萤火虫萤光素酶基因载体 ｐＧＬ４．２６扩增萤火虫萤光素酶基因片段， 将其插入连接于原核表达载体 ｐＥＴ２４ａ中，构建重组表达载体 ｐＥＴ２４ａＬｕｃ．经酶切鉴定及序列 分析后，将重组载体转化到表达菌株大肠杆菌 （ ）中，获得阳性重组菌 ／ ＢＬ２１ＤＥ３ ＢＬ２１ ＥＴ２４ａ ｐ 诱导蛋白高效表达并通过镍柱亲和层析纯化萤火虫萤光素酶 该 目的蛋白活性用 Ｌｕｃ．ＩＰＴＧ ． ＴＭ试剂进行验证并用于建立一种基于测量 含量的检测细胞生物活性的方法 与 ＢｒｉｈｔＧｌｏ ＡＴＰ ． ｇ 传统的细胞生物活性检测试剂盒 ， 以及 比较，该方法具有反应迅速、 ＭＴＴ ＣＣＫ８ ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ 活力高、灵敏度好、生产方便的优点，具有实际应用的潜力． 关键词：萤火虫萤光素酶； 蛋白表达； 蛋白纯化； 细胞活性 　 　 　 中图分类号： 文献标识码： ： ／ Ｑ８１４．９ Ａ 犇犗犐 １０．３９６９ ．ｉｓｓｎ．１０００５６４１．２０１２．０４．０００ 　　 　　 ｊ 犇犲狏犲犾狅犿犲狀狋狅犳犪犾狌犮犻犳犲狉犪狊犲犫犪狊犲犱犿犲狋犺狅犱犳狅狉狉犪犻犱犮犲犾犾 狆 狆 狏犻犪犫犻犾犻狋犱犲狋犲犮狋犻狅狀 狔 ， ， ， ＺＨＵＪｉｎｉｎ ＢＡＯＱｉｕｉｎ ＷＡＮＧＹｕｍｅｎ ＸＩＡＧａｎ ｇｊｇ　 ｙ ｇ　 ｇ