07-小鼠骨髓染色体的制备和观察(1).pptx

小鼠骨髓染色体制备及观察;1、实验目的与要求;许多化学毒物具有遗传毒性;染色体损伤的类型：;整倍性畸变;非整倍性畸变;如何评价化合物的遗传毒性？;评价染色体损伤的试验方法包括： 常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验;;2、实验原理;间期： G1期，DNA合成前期； S期，DNA合成期；DNA经过复制，含量增加一倍，细胞成为4倍体。 G2期，DNA合成后期。 分裂期： 前期：染色质浓缩形成染色体；中心体向细胞两极移动，纺锤体出现。 中期：核膜核仁消失，染色体排列于细胞的赤道平面上，从纺锤体发出 微管附着于染色体的着丝粒上。 后期：姐妹染色单体分离 末期：染色体解螺旋，重新出现核膜核仁，细胞一分为二;G1：从有丝分裂结束到DNA复制之前； S: DNA合成； G2：DNA复制结束到有丝分裂开始； M：有丝分裂期;增殖群细胞，细胞始终保持分裂能力，持续进入分裂循环； 不再增殖细胞，比如神经细胞； 暂不增殖细胞，比如肝脏细胞。;秋水仙素，又称秋水仙碱，能与微管蛋白二聚体结合，破坏纺锤体的形成，使染色体停滞在分裂中期。 本实验所用的小鼠骨髓细胞具有高度的分裂活性并且数量非常多,经秋水仙素处理后,可使分裂的细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗、固定、滴片染色等处理,便可制作较好的小鼠骨髓细胞染色体标本。;3、实验材料;4、实验步骤;5、实验结果;端着丝粒染色体;6. 注意事项;低渗处理是实验成败的关键，其目的是使细胞体积胀大，染色体松散。低渗处理时间过长，会造成细胞破裂，染色体丢失。低渗处理时间不足，细胞内染色体则易聚集在一起，不能很好伸展开来，观察时无法区分和计数。 固定液要现配现用。用固定液固定染色体形态至关重要，固定时间要充分，应在20 min以上。 载玻片要事前要酸液浸泡24～48h，自来水反复冲洗后，双蒸水冲洗后，烘干备用。临用前，用洁净纸包裹置于4℃冰箱中。 对于离心过后的沉淀于管底中的沉淀物，要用吸管吸入固定液将细胞轻轻吸打均匀。尤其最后一步，如果混合不均匀，可造成细胞聚集成团，在镜下就不易见到散在的中期染色体，影???染色体的后期分析。 剪骨骺端时，骨质碎片易附着在骨髓腔面，会被柠檬酸钠冲进离心管。 ;