毛竹PeDWF4基因克隆及表达模式分析-林业科学研究.PDFVIP

林业科学研究　２０１８，３１（５）：５０ ５６ ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ 　　ＤＯＩ：１０．１３２７５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｌｙｋｘｙｊ．２０１８．０５．００７ 毛竹ＰｅＤＷＦ４基因克隆及表达模式分析 １ １ １ １，２ １ １ １ 王思宁 ，孙化雨 ，李利超 ，杨意宏 ，徐　浩 ，赵韩生 ，高志民 （１．国家林业局竹藤科学与技术重点开放实验室，国际竹藤中心竹藤资源基因科学研究所，北京　１００１０２； ２．河北农业大学，河北，保定　０７１００１） 摘要：［目的］通过对毛竹ＰｅＤＷＦ４基因结构特点和表达特征的研究，揭示其在响应逆境胁迫过程中的作用。［方 法］采用同源序列比对的方法，从毛竹基因组数据库中获得ＤＷＦ４同源基因信息并克隆，通过生物信息学方法分析 该基因的结构、理化特征，以及基因编码蛋白的保守结构域、进化关系等，应用ＲＴＰＣＲ技术分析基因在毛竹不同组 织中的表达情况，使用实时荧光定量ＰＣＲ技术分别分析高盐、干旱、低温和强光等胁迫条件下该基因在叶片中的表 达模式。［结果］从毛竹中克隆获得 １个ＤＷＦ４同源基因ＰｅＤＷＦ４，编码区长度为１５０３ｂｐ，对应的基因组序列为 ６１４９ｂｐ，包含８个外显子和７个内含子，内含子完全符合ＧＴＡＧ剪接原则。ＰｅＤＷＦ４编码１个５００ａａ的碱性蛋白， 属于细胞色素Ｐ４５０家族的单加氧酶。组织特异性表达分析表明，ＰｅＤＷＦ４在毛竹不同组织中均检测到表达，其中， －１ 叶片中表达丰度最高，其次是根，茎、叶鞘和笋中的表达量较低。在ＮａＣｌ（４００ｍｍｏｌ·Ｌ ）和干旱胁迫条件下，叶片 中ＰｅＤＷＦ４的表达均先受到诱导，后受到抑制，其中，ＮａＣｌ处理下，表达量在２ｈ时达到最高（为对照的３．５倍），６ｈ 时最低（为对照的２０％）；干旱处理下，表达量在１ｈ时达到最高（为对照的２倍），８ｈ时最低（为对照的６０％）。强 －２ －１ 光（１２００ ｍｏｌ·ｍ ·ｓ ）和低温（４℃）胁迫均诱导ＰｅＤＷＦ４的表达，其中，强光处理２ｈ时表达量达到最高（为对 μ 照的４．５倍），随后降低，８ｈ时仍为对照的２倍；低温处理下，叶片中ＰｅＤＷＦ４表达量在 １ｈ时达到最高（约为对照 的３倍），随后持续下降，８ｈ时仍为对照的２倍。［结论］从毛竹中克隆了ＢＬ生物合成关键限速酶基因ＰｅＤＷＦ４，该 基因在毛竹中呈现组成型表达，在叶片中的表达受到ＮａＣｌ、干旱、低温和强光等非生物胁迫的影响，基因表达的变 化表明ＰｅＤＷＦ４可能有助于毛竹适应逆境胁迫。 关键词：毛竹；油菜素内酯；ＤＷＦ４；非生物胁迫；基因表达 中图分类号：Ｓ７１８．４６ 文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００１１４９８（２０１８）０５００５００７ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＰａｔｔｅｒｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＰｅＤＷＦ４Ｇｅｎｅ ｉｎＭｏｓｏＢａｍｂｏｏ（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓｅｄｕｌｉｓ） １ １ １ １，２ １ １ １ ＷＡＮＧＳｉｎｉｎｇ，ＳＵＮＨｕａｙｕ，ＬＩＬｉｃｈａｏ，ＹＡＮＧＹｉｈｏｎｇ ，ＸＵＨａｏ，ＺＨＡＯＨａｎｓｈｅｎｇ，ＧＡＯＺｈｉｍｉｎ （１．ＳｔａｔｅＦｏｒｅｓｔｒｙＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎＫｅｙＯｐｅｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｎｔｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＢａｍｂｏｏａｎｄＲａｔｔａｎ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＧｅｎｅＳｃｉｅｎｃｅｆｏｒＢａｍｂｏｏ ａｎｄＲａｔｔａｎＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢａｍｂｏｏａｎｄＲａｔｔａｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１００１０２，Ｃｈｉｎａ；