枯草芽孢杆菌的分离与鉴定.pptVIP

枯草芽孢杆菌的分离与鉴定 研究内容及方法 2 预期目标 3 论文进度安排 4 参考文献 5 立题依据 1 1.立题依据 近年来，微生态制剂（芽孢杆菌、乳酸杆菌、酵母菌和光和菌等的混合或单一制剂）广泛应用于饲料工业添加剂的开发、水产养殖、水质净化和病虫害的防治，这类产品的应用极大地改善了畜牧业及渔业的产品品质，减少或避免了使用一些副作用较大的农药。随着生态环境日益恶化，养殖生产中用药量不断参加，其后果影响了水产品安全和产业的可持续发展。很多发达国家已制定严格的农产品进口检验标准，大幅降低农药和抗生素的残留量，用微生物制剂改善养殖水体微生态环境也受到人们越来越多的关注改善。 养殖水体微生态环境的改善是多种微生物共同作用的结果，能更有利于吸收、分解SO2、H2S、CH3等具恶臭味的有害气体。同时，这些微生物又可以产生无机酸,形成不利于腐败微生物生活的酸性环境，并从根本上降解分解时产生恶臭气体的物质。 若能将来源丰富、污染环境的水产废弃物， 经过无公害化处理转化为种植业所急需的有机肥，则既可以增加经济效益,，又能改变粪便堆积、臭气挥发的状态。水产腐生质中存在着多种微生物，其中枯草芽孢杆菌具有净化水质的作用。本实验拟在水产腐生质中分离出枯草芽孢杆菌，为研究改善水体问题的混合菌群打下基础，同时为枯草芽孢杆菌在养殖水质的生态调控应用提供参考。 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7-0.8×2-3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6-0.9×1.0-1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。有的菌株是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系，故常作选育核苷生产菌的亲株或制取5-核苷酸酶的菌种。广泛分布在土壤、水体及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。 研究内容及方法 2 预期目标 3 论文进度安排 4 参考文献 5 立题依据 1 2.研究内容及方法 对水产腐生质中的 菌群进行培养并分离纯化 通过生化鉴定和16S rRNA鉴定法， 对分离出的一种甚至多种单一 菌落进行鉴定，得到枯草芽孢杆菌 了解枯草芽孢杆菌对净化水质的影响， 运用于水产养殖业，并为其在 养殖水质的生态调控应用提供参考 操作方案见下图： 2.1 实验准备 水产腐生质（由多种未知菌群组成） 菌种分离材料 微量生化反应管 ? LB培养基 ? TSA培养基 ? 吲哚试验培 养基 ?葡萄糖产气实验 ?枸橼酸盐试验 ?产H2S实验 ?产氨实验 等 菌种分离材料 菌种分离材料 实验培养基 菌种分离材料 实验培养基 实验器材 ?光照恒温培养箱 ?超净工作台 ?冰箱 ?可调移液枪 ?光学显微镜 ?天平、培养皿、三 角瓶、容量瓶、铂尔丝、酒精灯 实验用培养基的配比 LB培养基 酵母膏5g 胰蛋白胨10g 氯化钠10g 水1000ml 琼脂粉3 % PH 7.6 TSA培养基 葡萄糖2.5g 磷酸二氢钾2.5g 氯化钠5g 大豆蛋白胨3g 蛋白胨17g 水1000ml 琼脂粉3% PH 7.6 吲哚试验培养基 蛋白胨10g 氯化钠1g 蒸馏水1000ml PH 7.6 Ehrlich氏试剂：对位二氨基苯甲醛1g，无水乙醇95ml，浓盐酸20ml，先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存 2.1 实验准备 水产腐生质（由多种未知菌群组成） 菌种分离材料 微量生化反应管 ? LB培养基 ? TSA培养基 ? 吲哚试验培 养基 ?葡萄糖产气实验 ?枸橼酸盐试验 ?产H2S实验 ?产氨实验 等 菌种分离材料 菌种分离材料 实验培养基 菌种分离材料 实验培养基 实验器材 ?光照恒温培养箱 ?超净工作台 ?冰箱 ?可调移液枪 ?光学显微镜 ?天平、培养皿、三 角瓶、容量瓶、铂尔丝、酒精灯 2.2 细菌的初步分离及纯化 取少量水产腐生质溶解于 50ml蒸馏水中，可调移液枪吸取200μl上层清液平铺于培养基，并用经酒精灯火焰消毒的铂尔丝将液体均匀涂布于培养基上，入恒温箱培养24h后观察平板上的菌落，挑取疑似枯草芽孢杆菌菌