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3.荧光原位杂交（FISH） 是一种通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交，在荧光显微镜下能原位显示细胞核内杂交信号的分子细胞遗传学技术。 FISH技术用于检测基因扩增的准确性比其他检测技术高，可以避免由于染色体的多体而呈现的假阳性，故被誉为“金标准”。但FISH技术操作较复杂，试剂(荧光标记的探针试剂盒)和仪器设备(荧光显微镜)昂贵，目前在国内只有少数实验室具有相应技术条件进行该技术的检测。 （1）两种探针 ◆应用Her-2和17号染色体双荧光标记探针，两种信号的比值（2或者=2）Her-2是否扩增 ◆应用单一针对Her-2的地高辛标记探针，直接定量Her-2的扩增程度 （四）. Her-2阳性状态的检测方法 （一）组织标本的制备注意环节 1、标本的类型： 新鲜标本、 针吸活检标本、 粗针穿刺标本、 外科手术标本 细针穿刺液基细胞 111例IHC、CISH与FISH检测一致的乳腺癌中，53例FNAs（切除外科标本）与组织病理标本结果高度一致。 Vocaturo A. Novelli F, et al. Oncologist. 2006 Sep; 11(8): 878-86. HER2表达在原发肿瘤和转移灶呈高度一致 Study Percentage IHC overexpression Primary tumors Metastases Masood Bui(2000) 32% 32% Shimizu et al(2000) 38% 38% Simon et al(2001) 25% 22% Tanner et al(2001) 28% 28% Gancberg et al(2002) 29% 27% Vincent-Salomon et al(2002) 25% 20% Tsutsui et al(2002) 25% 25% Carlsson et al(2004) 55% 55% 2.标本的固定 （1）取材到固定时间1小时 （2）固定时间6-48时间，一般不超过24小时 （3）固定液10%中性福尔马林固定液 3.标本的取材 5mm 4.组织蜡块和组织切片 （1）切片后不宜置于恒温时间过长（4-6周） （2）厚度 IHC 3-5um CISH/FISH 4-5um （二）常用检测方法 1.免疫组化（IHC） 检测Her-2蛋白表达 （1）抗原修复：95-99℃ EDTA（1mM pH80） 或枸橼酸钠 （0.05M pH6.0） （2）常用IHC 检测的抗体/试剂盒 HercepTest: 美国FDA批准用于临床诊断 公司名 Novacastra (newcastle, upon tyne, UK) Genentech(San Francisco, CA) Zymed ( San Francisco, CA) DAKO( San Francisco, CA) DAKO ( San Francisco, CA) 抗体 阳性率 Hercept Test (DAKO) 31/86 (38.1%) AO485 (DAKO) 25/66 (37.8%) 4D5 (Genetech) 15/86(17.4%) CB11 (Biogenex Novocastra) 25/86 （9.1%） ◆ CB11 或4D5 （+++） Hercept Test（+++）; Hercept
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