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无菌操作与接种技术 实验目的 掌握平板划线法、斜面接种方法。 熟悉接种工具、接种环境要求和无菌操作要领。 实验方法 (一)接种工具 接种针和接种环：由三部分组组成，即环（针）、金属柄和绝缘柄。 接种前后都要过火灭菌。 （二）接种环境 操作需在超净工作台或无菌室内进行。 酒精灯 （三）细菌接种的基本程序 （四）平板分区划线法 　 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 分区划线法 将上述已接种细菌的培养基置37℃恒温培养箱中孵育18～24h，观察细菌的生长现象。 细菌在固体培养基中的生长现象 菌落 定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 * * 实验原理 分离：从混杂的微生物群体中获得单一菌株纯培养的方法。 纯种（纯培养）：一株菌种或一个培养物中所有的细胞或孢子都是由一个细胞分裂、繁殖而产生的后代。 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 稀释法分离纯化的基本流程 连续划线法 分区划线法 实验器材 白色葡萄球菌，大肠杆菌 接种环，酒精灯，斜面和平板培养基 恒温培养箱 灭菌接种环 沾取标本 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境 细菌斜面接种 用于鉴定和保存菌种。 细菌斜面接种的基本程序 取菌种试管和待接种的斜面试管 灭菌接种环 沾取标本 接种 接种后灭菌接种环 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环