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蒽酮法测定可溶性糖 摘要：用蒽酮法测定苹果熟果中糖类的含量, 波长620 nm, 检测线性范围0. 01～0. 5 mg / ml, 相关系数为0. 999 3, RSD= 5. 64% 回收率为98. 56%。此方法操作简便准确、显色灵敏、重现性好、不受还原性物质的干扰。能测定总糖, 还能测定可溶性糖, 因此适合野生植物中糖类含量测定。 关键词：苹果果肉; 蒽酮法; 可溶性糖; 含量测定 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。 一、材料 实验材料: 苹果 试剂: 1. 葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL ）：准确称取 10mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 10 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。 2．蒽酮试剂：称取 0.1 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中）100mL 中，冷却至室温。 仪器设备:分光光度计，分析天平，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管,剪刀，玻棒，水浴锅，，漏斗，滤纸。 二、方法与结果 1. 样品中可溶性糖的提取 称取剪碎混匀的新鲜样品 0.5 ～ 1.0 g （或干样粉末 5 ～ 100 mg ），放入大试管中，加入15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min ，取出冷却，过滤入 100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量 试 剂 管 号 0 1 2 3 4 5 100 μg/mL 葡萄糖溶液（ mL ） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ mL ） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蒽酮试剂（ mL ） 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 葡萄糖量（ μg ） 0 20 40 60 80 100 将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮 10 min ，取出冷却，在 620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ μg ）为横坐 标绘制标准曲线。 3 ．样品测定 取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。 三、结果计算 溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100 四、结果分析 1.葡萄糖的标准曲线见下图．通过葡萄糖标准曲线得到的回归方程为 ：A=0.0039*C-0.0005 ， R 2= 0.9891 ，线性关系良好 ，并且可以由此推出公式 ：C=(A+0.0005) ／ 0.0039． 2.样品质量及其吸光度值 3.可溶性总糖的含量及其分析 4.小结 本实验的原理是苹果样品在强酸作用下脱水生成糖醛或其衍生物后,与特异性显色剂蒽酮迅速而完全地缩合成稳定的有色物质,其生成量与可溶性糖含量之间存在着定量关系,根据试验方法学考察和样品测定,在 620 n m处有最大吸收峰,且线性关系良好。 参考文献: 1．国家药典委员会. 中华人民共和国药典 2005版 [M].北京: 化学工业出版社, 2005 : 199 . 2．封士兰, 胡芳弟, 刘欣, 等. HPLC研究甘肃产白条党参指纹图谱 [J] .中成药, 2005 , 27(7): 745- 748 . 3．宋丹, 程雪梅,李隆云, 等. HPLC测定不同产地川党参中党参炔苷的含量 [J] .中国中药杂志, 2008 , 33 (17):2133- 2135 . 4．王忠. 植物生理学 [M]. 北京: