2019课题2月季的花药培养.ppt.pptVIP

1、能够通过镜检找到处于适宜的发育期的花粉。用醋酸洋红法或焙花青-铬矾法检测单核靠边期的花粉粒。 2、花药出现污染的原因： (1)消毒不彻底； (2)接种室污染； (3)人为因素的交叉污染等。 植物组织培养 * * 课题2 月季的花药培养 课题目标： 说出被子植物花粉发育的过程及花药培养产生花粉植株的两种途径， 说出影响花药培养的因素， 学习花药培养的基本技术， 尝试用月季或其他植物的花药进行培养。 课题重点和难点：选取适宜的培养材料和培养基。 花的结构：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊 一、基础知识 1、被子植物的花粉发育 (1)被子植物雄蕊由 和 两部分组成。 花药 花丝 (2)花粉是由花粉母细胞经过 而形成，因此，花粉是 的生殖细胞。 (3)被子植物花粉的发育要经历小孢子 、 和 等阶段。 减数分裂 单倍体 四分体时期 单核期 双核期 1个小孢子母细胞 减数分裂 4个小孢子 有丝分裂 4个 花粉管细胞核 4个 生殖细胞核 1次 有丝分裂 8个精子 4个 营养细胞 4个 生殖细胞 360高考P99 2、产生花粉植株的两条途径 途径一：花粉通过胚状体阶段发育为植株； 途径二：花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株。 人工种子是由外植体通过组织培养而获得的胚状体，然后加上人造胚乳，人造种皮而制成。 外植体进行的是有丝分裂，属于无性生殖。 3、影响花药培养的因素 (1)主要的影响因素： 材料的选择与培养基的组成 不同植物的诱导成功率很不相同，就同一种植物来说亲本的生理状况对诱导成功率也有直接影响。 ②选择合适的花粉发育时期是提高诱导成功率的重要因素 ①选材 一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养的成功率最高。 通常选择完全未开放的花蕾。 ③单核期花药的挑选 亲本植株的生长条件、材料的低温预处理 以及接种密度等对诱导成功都有一定的影响。 (2)其他因素 二、月季花药培养的实验操作 1、材料的选取 ②某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 ①最常用的方法有醋酸洋红法 (2)检查方法 一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 (1)选择花药： 2、材料的消毒 (1)用酒精处理 ①花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。 ②无菌水清洗 ③无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 (2)用消毒液(氯化汞)处理 ① 放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2-4分钟(也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液) ② 无菌水冲洗3-5次 用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。 3、接种和培养 在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药 ②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成 立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。 (1)剥取花药 ①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织 (2)接种 注意： KT ③注意： 如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。 ②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体；长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化(主要原因是营养核和生殖核融合造成的) 4、鉴定和筛选 ①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。 幼小植株形成后才需要光照。 (3)培养 三、结果分析与评价 练习1. 答：F2代紫色甜玉米的基因型组成可能为Aasusu或AAsusu。如果运用常规育种方法，将F2代中的紫色甜玉米与白色甜玉米（aasusu）进行测交，可以选择出基因型为AAsusu纯种紫色甜玉米。 但这种方法比较繁琐，耗时也较长，需要至少三年的选种和育种时间。 如果利用花药培养的技术，在F1代产生的花粉中就可能有Asu的组合，再将花粉植株进行染色体加倍，就可以直接得到紫色甜玉米的纯合体（AAsusu）。这种方法可以大大缩短育种周期。 测交中后代如果分离了，亲本的基因型就是Aa,如果不分离就是AA 。 植物组织培养技术与花药培养技术的异同点： 取材为花粉，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。 花药培养技术 外植体为体细胞，染色