蛋白质表达：带GST标签蛋白的纯化.docVIP

产品使用说明书 GST·Bind? 纯化试剂盒 试剂盒简介 以下货号试剂和试剂盒均可参照此说明书操作：建议同时参考本说明书英文原文（说明书编号 TB235）。 GST·Bind树脂：10ml 货号70541-3，50ml 货号70541-4，25ml 货号70541-5 GST·Bind?缓冲液试剂盒：货号70534-3 BugBuster? GST·Bind纯化试剂盒：货号70794-3 GST·Bind?树脂 GST·Bind?树脂用于一步法亲和层析纯化融合表达谷胱甘肽S转移酶（GST）的目的蛋白或天然GST或 谷胱甘肽结合蛋白，操作方便快捷。GST·Tag?融合表达蛋白带有220个氨基酸的GST标签（如表达自 Novagen的编号为pET-41，-42，或-49的载体的蛋白），能够用GST树脂非常方便地得到干净一致的纯 化蛋白。采用10mM还原型谷胱甘肽的温和洗脱，也使目的蛋白的活性受到了很好的保护。GST·Bind树 脂采用11个原子的间隔臂（约16 ?），通过硫键共价结合还原型谷胱甘肽。这种特别设计的树脂使纯化 效率得到提高，因此Novagen的GST树脂载量达到每ml树脂结合载量为5–8mg目的蛋白。 GST·Bind? 缓冲液试剂盒 GST·Bind缓冲液试剂盒包括了从GST·Bind树脂和GST·Mag?磁性琼脂糖树脂纯化目的蛋白所需的结 合，冲洗和洗脱所需的缓冲液。试剂盒所含成分足够用于10个2.5ml柱的纯化。具体包括： · 2×100ml 10×GST Bind/Wash Buffer （43mM Na2HPO4，14.7mM KH2PO4，1.37M NaCl，27mM KCl，pH7.3） · 40ml 10×Glutathione Reconstitution Buffer (500mM Tris-HCl，pH8.0) · 1g Glutathione，Reduced，Free Acid BugBuster? GST·Bind?纯化试剂盒 BugBuster? GST·Bind纯化试剂盒提供了抽提细胞可溶蛋白和纯化GST·Tag融合蛋白所需的各种试剂， 包括GST·Bind树脂，GST·Bind缓冲液试剂盒，Benzonase?核酸酶和BugBuster蛋白抽提试剂，使用方 便。BugBuster温和破坏大肠杆菌细胞壁释放可溶蛋白，是比弗式压榨法或超声波法等机械处理方法更好 的选择，简单、快速且成本低廉。这种非离子配方的去污剂混合物能非常高效地抽提蛋白并保证可溶蛋 白不变性。 注意：BugBuster是以Tris-HCl-based缓冲液提供，如果需要使用别的缓冲体系，Novagen提供的 BugBuster无伯胺型（为PIPPS缓冲）或10×BugBuster（无缓冲液）形式都是很好的选择。 BugBuster? GST·Bind纯化试剂盒包括： · 2×100ml BugBuster?蛋白抽提试剂 · 10,000U Benzonase?核酸酶，纯度90% · 10ml GST·Bind树脂，以20ml 50% v/v悬浊液形式提供 · 4个色谱柱 · GST·Bind缓冲液试剂盒（即：100ml 10×GST Bind/Wash Buffer，40ml 10×Glutathione Reconstitution Buffer，1g Glutathione，Reduced，Free Acid） 储存 要求4℃存放的包括：10X GST Bind/Wash Buffer；10X Glutathione Reconstitution Buffer； Glutathione，Reduced，Free Acid；GST·Bind树脂（树脂千万不能冻） 要求-20℃存放的包括：Benzonase核酸酶 常温存放的包括：BugBuster，色谱柱 默克生命科学服务热线：400 820 8872 bioteam@ 注意：BugBuster在4℃以下存放时会有去污剂成分析出，在室温下温和 摇晃即可重溶，试剂功能不受影响。 总述 本操作说明用于从大肠杆菌制备的蛋白抽提物（机械法破碎或BugBuster?蛋白抽提试剂制备）、用 GST·Bind?树脂进行带GST·Tag?的目的蛋白的纯化。目的蛋白所带的必须是具有正确折叠的220个氨 基酸的GST（GST·Tag序列）sequence)，能够与固定化的还原型谷胱甘肽互作因而被亲和纯化。关于 克隆表达、诱导发酵的详细介绍请参考“pET系统操作手册”。 细胞抽提物的制备 操作前的考虑 · · · · BugBuster蛋白抽提试剂，以及Benzonase?核酸酶、rLysozyme?溶菌酶等能极大地方便可溶蛋白 及包涵体的制备，从而完全替代机械法操作，尽可能地保全蛋