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’G! OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO 南方医科大学学报TgO),*.7Oe/0O^?6@BOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO!YZ!YT’B
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核干细胞因子基因968RS 表达载体的构建及鉴定
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张功员 赵国强 尹 磊 张钦宪 郑州大学基础医学院 组织学与胚胎学教研室 微生物学与免疫学教研
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室!河南 郑州 (HH! #
摘要 目的 构建针对核干细胞因子 基因的小干扰 真核表达载体 方法 根据 提供的 基因
! TR)B 8RST968RSB % U/?V:?W1 R)
SXY!H!H1F8RS 序列及 968RS 设计原则设计 968RS 筛选得到 %!$%((1?. %GG$! %#1?. 和(Y#$HH1?.1’ 个 %G12+ 片段
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为靶序列 合成带有 酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列 经过退火 将此序列克隆至载体 中
Z [ [ \1 $ +8RS]$^N%
!# $%
构建重组表达载体 转化_H 提取质粒 应用;E8 技术和测序方法鉴定重组克隆 转染入食管癌IEG# 细胞 检测
# ! $ $ % $
基因沉默情况 结果 筛选得到 个目的片段的阳性重组克隆 测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致
R) ;E8 ’
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8]$;E8 和‘/9./-?O2D,. 检测显示构建的968RS 表达载体可显著降低IEG# 细胞中R)OF8RS 和蛋白水平的表达%
结论 成功构建出一组针对 基因的 表达载体 为下一步 基因的 干扰研究鉴定了基础
R ) 968RS R) 8RS
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关键词 核干细胞因子 8RS 干扰 基因克隆 IEG#
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