福寿螺Β2葡萄糖苷酶在脲溶液中失活动力学研究-Core.PDF

第 39 卷　第 1 期 . 39　 . 1 ( ) V o l N o 厦门大学学报 自然科学版 　2000 年 1 月 ( ) J an. 2000　 Jou rn a l o f X iam en U n iver sity N atu ra l Scien ce 文章编号:(2000) 0 10 10205 福寿螺 葡萄糖苷酶在脲溶液中 失活动力学研究 陈清西, 石　艳, 张　吉吉, 黄建设, 庄总来 ( 厦门大学生物学系, 福建 厦门　36 1005) 摘要: 研究福寿螺 葡萄糖苷酶在脲溶液中变性作用, 测定酶在脲溶液中的失活动力学, 测定游离 酶(E ) 和酶底物络合物(E S) 的脲失活的微观速度常数, 并加以比较, 表明底物存在对于酶被脲的失 活具有明显的保护作用. 关键词: 福寿螺; 葡萄糖苷酶; 脲; 失活动力学 中图分类号: Q 356. 1 文献标识码:A 　　　　　　　　　　　　　　　 ( ) 我们 曾经报道了福寿螺 葡萄糖苷酶 , 3. 1. 2. 2 1, 简称 的分离纯 G lu co sida se EC B G 化、理化性质及酶的功能基团的性质的研究结果[ 1, 2 ]. 在变性剂存在下, 酶的变性作用与失活作 用的研究是探讨酶构象与催化功能关系的重要手段. 近年来有关这方面的研究在其它的酶上 [3～ 5 ] [ 6 ] 有了广泛的研究报道 并得到了可喜的成绩. 本文采用邹承鲁 介绍的方法, 即在变性剂存 在下监测酶催化底物反应的动力学过程, 建立酶在脲溶液中的失活作用模型, 分析测定游离酶 (E ) 和结合酶(E S) 的失活速度常数, 阐明在脲变性时底物对酶失活的保护作用. 以期获得有关 酶的构象与活力关系的有益信息, 为该酶的开发应用打下良好的基础. 1　材料与方法 1. 1　材　料 以福寿螺( ) 的内脏为提酶材料; 对硝基苯酚 葡萄糖苷( A mp u lla r ium C rossean D pN P G) 、超纯脲为 Sigm a 产品; Sep h adex G200 和D EA E Sep h adex A 50 为 Ph am acia 进 口分装. 其它试剂均为国产A R 级. 试剂均用玻璃重蒸水配制. 1. 2　方　法 ( ) [ 1 ] 福寿螺 葡萄糖苷酶 , 3. 1. 2. 2 1, 简称 的分离纯化同前文 , 先按