H_D交换质谱分析法在结构生物学研究中的应用.docVIP

 H/D 交换质谱分析法在结构生物学研究中 的应用# 袁航，刘艳，陈培燕，林东海，赵玉芬** 5 10 15 20 （厦门大学化学化工学院，化学生物学系，化学生物学福建省重点实验室， 福建 厦门 361005） 摘要：氢氘交换和质谱相结合的分析方法广泛应用于蛋白质的构象及其动力学研究，其具有 样品用量少、快速、灵敏、简便的优点。本论文着重从氢氘交换的原理及相关机制；影响氢 氘交换的各个因素；氢氘交换质谱法中常用质谱检测仪器，以及质谱检测分析法等四个方面 进行概述。 关键词：生物有机质谱；氢氘交换；结构生物学；综述 H/D exchange and mass spectrometry in Structural Biology Yuan Hang, Liu Yan, Chen Peiyan, Lin Donghai, Zhao Yufen (Key Laboratory for Chemical Biology of Fujian Province, Department of Chemical Biology, Department of Chemistry, College of Chemistry and Chemical Engineering, Xiamen University, FuJian XiaMen 361005) Abstract: The combination of H/D exchange (HDX) and mass spectrometry technology is widely applied to the kinetic and conformational studies of proteins. The HDX-MS method has some advantages, such as fewer samples, fast detection and more sensitive than the traditional methods. In this review, we discussed four main contents in details, containing the principle and the mechanism of the exchange, the effects on the HDX, the application of the equipments, and the specific HDX-MS methods. Keywords: bioorganic mass spectrometry; H/D exchange; structural biology; review 25 0 引言 目前，结构生物学的研究方法主要包括 X-Ray[1]，NMR[2]和 MS[3]等技术。X-Ray 能够 获得详细的结构信息，然而衍射效果好的蛋白质晶体不容易得到，耗时长，往往事倍功半， 因此这种方法具有很大的局限性[4-7]。NMR 和 MS 是研究结构生物学最常用的两种工具，但 30 35 40 是 NMR 对浓度的要求要高于质谱 2 个数量级，同时核磁的检测受到蛋白质大小的限制，在 ≦30KDa 的条件下才能够准确测定。此外，NMR 的灵敏度、蛋白质的溶解度、分析时间的 长短、独立氨基质子的分配等也是 NMR 技术的障碍[8]。MS 可以在 fmol 水平上准确分析分 子量高达几万到几十万的生物大分子，具有样品消耗量少、分辨率高、准确性强、操作简便 的优势，并且能够和其他的技术如液相色谱、气相色谱、毛细管电泳技术联用进行复杂样品 的分离分析[9]。 〕 从而通过对蛋白质主链的氢氘交换来调控蛋白质在溶液中的溶解度。1993 年，Zhang[11]等人 将氢氘交换和 MS 联用能够在不改变蛋白质结构的情况来探测蛋白质的溶解度。NMR 和 H/D 交换联用可以测得蛋白质特定位点的氢氘交换率，但是有些氨基上的氢原子交换速率太快， 对于绝大部分的蛋白质和蛋白质之间的相互作用的研究，采用 NMR 技术还是无法做到的 [12-14] 基金项目：教育部新教师基金（200803841009） 作者简介：袁航，（1987-），女，研究生，主要研究方向：生物有机质谱。 通信联系人：刘艳，(1976-)，女，副教授，主要研究方向:生物有机质谱. E-mail: stacyliu@ -1-最初在 1954 年 Havidt[10] 最初在 1954 年 Havidt[10] 等人发现蛋白质主链氨基上的氢原子能够和溶液中的 D 交换， 。Mandell[15]等人将 MALDI-TOF MS 和 H/D 交换联合起来并将其作为研究蛋白质之间  和蛋白质配体相互作用的最佳