第六章 微生物的生长及控制.pptVIP

第六章 微生物的生长及环境条件 第一节、获得纯培养体的方法 第二节、细菌生长的测量 第三节、细菌群体生长规律 第四节、环境条件对微生物生长和代谢的影响 第五节、微生物生长繁殖的控制 生长 微生物细胞吸收营养物质，进行新陈代谢，当同化作用异化作用时，生命个体的重量和体积不断增大的过程。 繁殖 生命个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。 一、获得纯培养体的方法 纯培养（pure culture） 从一个细胞繁殖达到的后代称为纯培养 （一）稀释分离法 稀释平皿分离法 平皿划线分离法 单细胞挑取法 （二）纯培养分离中选择性培养基的利用 （一）稀释分离法 1.稀释平皿分离法 涂布平皿法 倾注平皿法 3.单细胞（单孢子）挑取法 采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养的方法。该方法要在显微镜下进行。 毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。 显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获得纯培养。 小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。 （二）纯培养分离中选择性培养基的利用 为了从混杂的微生物群体中分离出某种微生物，可以根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选择培养的方法进行分离。 培养基中加入化学试剂 富集培养 控制环境因素 二、细菌生长的测量 （一）细胞数量的测定 （二）细胞生物量的测定 （一）细胞数量的测定 1.细胞总数的测定 （1）显微镜直接计数法 （2）比浊法 2.活细菌数量的测定 （1）稀释平皿测数法 （2）最大概率法 （3）浓缩法 （2）比浊法 原理 在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌数越多，光密度越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。 在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度(optical density, 即OD)表示菌量。 实验测量时应控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。 （1）稀释平皿测数法 通常用来测定细菌、酵母菌等单细胞微生物的生长情况或样品中所含微生物个体的数量（细菌、孢子、酵母菌） 一个菌落可能是多个细胞一起形成，所以在科研中一般用菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示，而不是直接表示为细胞数。 （2）最大概率法(the most probable number method, MPN) 本方法特被适用于含菌量少的样品或一些在固体培养基上不宜生长的细菌样品的测数； 如：测定土壤微生物种特定生理群的数量和检测污水、牛奶及其它食品种特殊微生物类群的细菌数量 缺点：只能进行特殊生理群的测定，结果也较粗放 （3）浓缩法（滤膜法） 测定空气、水等体积大而且含菌浓度较低的样品中的活菌数 （二）细胞生物量的测定 1.测定细胞干重法 2.DNA含量测定法 3.ATP含量测定法 4.代谢活性法 三、细菌群体生长规律 （一）分批培养中细菌群体的生长 1.细菌的生长曲线 2.同步培养 3.固体培养基上细菌群体的生长 （二）细菌群体生长的连续培养 1.恒化培养 2.恒浊培养 3.分批培养和连续培养比较 （一）分批培养中细菌群体的生长 1.细菌的生长曲线 定量描述液体培养基中微生物群体规律的实验曲线称为生长曲线（growth curve） （细菌）典型生长曲线： 以细胞数目的对数值作纵坐标，以培养时间作横坐标，就可画出一条由延滞期、指数期、稳定期和衰亡期4个阶段组成的曲线，这就是微生物的典型生长曲线 典型—只适用于单细胞微生物如细菌和酵母菌 非典型—丝状真菌和放线菌：生长延滞期、快速生长期和生长衰退期，无指数生长期 根据微生物的生长速率常数（growth rate constant）,即每小时分裂次数（R）的不同，一般将典型生长曲线分为4个时期 （1）延滞期(Lag phase) 影响延滞期长短的因素 接种龄 接种量 发酵工业中的接种量一般为种子:发酵培养基=1:10v/v 培养基成分 迟缓期出现的原因 微生物接种到一个新的环境，暂时缺乏分解和催化有关底物的酶，或是缺乏充足的中间代谢产物等。为产生诱导酶或合成中间代谢产物，就需要一段适应期。 迟缓期的长短与菌种的遗传性、菌龄以及移种前后所处的环境条件等因素有关，短的只需要几分钟，长的需数小时。 （2）指数期(Log phase) 指数期的3个重要参数 繁殖代数—n 生长速率常数—R 代时—G （2）指数期(Log phase) 影响指数期微生物代时长短的因素： 菌种：不同菌种代时差别极大； 营养成分：在营养丰富的培养基中生长代时短; 营养物浓度：既影响微生物的生长速率又可影响