蛋白质在金属螯合亲和色谱中的竞争洗脱-分析化学.PDF

38 (FENXI HUAXUE) 4 第 卷 分析化学 研究报告 第 期 2010 4 Chinese Journal of Analytical Chemistry 493 ～ 497 年 月 DOI :10. 3724 / SP. J. 1096. 2010. 00493 蛋白质在金属螯合亲和色谱中的竞争洗脱 * 1 ，2 1 1 1 2 李蓉 王燕 陈国亮 王小刚 郑建斌 1 ( ， 7 10069) 2 ( ， 7 10069) 西北大学化工学院 西安 西北大学分析科学研究所 西安 C ， (IDA-Cu ) 。 摘 要 以细胞色素 和溶菌酶为代表 研究了蛋白质在强亲和性金属螯合柱 ? 上的保留行为 、 IDA-Cu 。 PBS NaAc-HAc 考察了竞争剂 缓冲体系对蛋白质在 ? 柱上保留值的影响 发现在 和 缓冲体系用咪 (Imid) (Gly) ， ; Gly Imid ， pH 唑 和甘氨酸 作竞争剂 可使蛋白质得到较好分离 在 和 竞争体系 分别研究了 值变 IDA-Cu 。 IDA-Cu 化对蛋白质在 ?柱上保留值的影响 为使蛋白质在 ? 柱上得到有效分离且减少固定金属 Cu2 + ， Gly ， pH 。 Imid ， pH 的流失 对 体系 最好采用竞争置换和降低 值相结合的方式进行洗脱 对 体系 溶液 值 6. 0 ， pH 。 ， IDA-Cu 应控制在 为宜 低 值下蛋白质则不宜被洗脱 结果表明 竞争剂浓度与蛋白质在 ? 柱上的保 。 ， 。 (k ′) 留关系均符合计量置换模型 随着竞争剂浓度的增加 蛋白质的保留值减小 保留因子 的对数与竞争剂 (1/ ［D ］) ， 0 . 984 0 . 986 。 浓度倒数 的对数具有良好的线性关系 其线性相关系数分别在 和 以上 ; ; ; 关键词 金属螯合亲和色谱 保留行为 蛋白质 竞争剂 1 引 言 20 70 ，Porath ［1］ (MCAC)， 世纪 年代 等 首先提出金属螯合亲和色谱 利用络合配基将金属离子固定 ， 。 、