饲料中18种氨基酸的测定柱前衍生HPLC法-博纳艾杰尔Agela.PDF

饲料中18种氨基酸的测定（柱前衍生HPLC法） 应用编号：AF10023 氨基酸对动物的生长、神经系统的发育及动物体内营养 色谱柱：Venusil® AA 氨基酸分析专用柱 物质的正常代谢都有重要的作用，而且蛋白质是动物生长必 4.6 ×250 mm ，5 µm，100 Å 需的营养物质，是评价饲料营养成分的一种重要物质，而氨 流 速：1 mL/min；进样量：10 µL 基酸是构成蛋白质的基本单位，所以氨基酸的种类和含量也 检测波长：254 nm ；柱 温：40 ℃ 就是评价饲料质量的根本依据，从而准确检测氨基酸的含量 检测梯度如表1 和种类具有重要意义。柱后衍生的方法，虽然准确性高，但 表1 流动相梯度变化表 是耗时长、灵敏度低，所以本文采用柱前衍生的方法以缩 短分析时间，增加灵敏度。同时该方法得到的氨基酸衍生物 时间 流动相A 流动相B 在 -20 ℃ 可保存数月，克服了柱前衍生法衍生物不稳定的缺 0 100 0 点，另外该方法准确性高，用标准品做未知样品进行检测， 2 100 0 检测的含量与标准品的标示值非常接近。 15 90 10 25 70 30 1. 样品前处理 33 55 45 33.1 0 100 酸水解法：准确称取一定量的样品，使样品氨基酸总量 38 0 100 在 50~75 mg 范围内，置于 20~30 mL 安瓿瓶中，加入 10 mL 38.1 100 0 含 0.1% 苯酚的 6 mol/L 盐酸，振摇使样品溶解或者是样品 45 100 0 均匀分散在溶液中，将安瓿瓶置于 -20 ℃ 冰箱中冷冻3~5 分 钟，充氮后用喷灯熔封，然后置于 110 ±1℃ 烘箱中水解 24 小时，取出冷却，取水溶液 1 mL ，置于浓缩管中用浓缩仪 4. 实验结果与讨论 浓缩至干，加入 1 mL 的 0.1 mol/L 稀盐酸溶解，用 0.45 µm 滤器过滤后，取清液贮存于冰箱中，供衍生使用。 4.1 液相条件的建立 样品中氨基酸含量比较低，而且直接检测溶剂效应较 2. 衍生方法 大，经过衍生后直接检测样品中的氨基酸不能完全分离，本 文通过用水稀释衍生溶液的方法降低检测中的溶剂效应，并 准确量取水解后溶液及氨基酸标准品 200 µL ，分别置 且经过优化流动相梯度使 18 种氨基酸得到良好的分离。 于 1.5 mL 离心管中，往每支离心管中准确加入正亮氨酸内 标 50 µL ，然后分别加入三乙胺乙腈溶液 100 µL 和异硫氰 但是实际检测过程中相同的检测条件下，仪器不同，分 酸苯酯乙腈溶液