临俅床化学上氨基酸有机酸及核苷类的二维薄层色谱多相分离＊.PDFVIP

临俅床化学上氨基酸、有机酸及核苷类 的二维薄层色谱多相分离* 吴有光 匡渤海 龙 飞 江（西医学院 南昌 330006） 提要 在同一块薄层板上多相二维分离 30余种氨基酸、40余种非挥发性有机酸和20余种碱基-核苷类化合 物。应用一对新的展开剂，用紫外灯-吖啶试剂-镉茚三酮试剂组合显色定位分析，改良了尿液非挥发性有机酸的 溶剂萃 取 。尿 液 中此巳三 化合物 提 取物 的多相 二堆 色谱 分 离效果 良好 。 关键词 二维薄层色谱法，氨基酸、非挥发性有机酸、碱基核苷类，尿 核 苷 类 的 标 准 液 配 制品分 别鹜同 文献 [6～ 9。 1 前言 显色液：有机酸的吖啶试剂配制和氨基酸的镉 对体液中氨基酸、有机酸、碱基-核苷等三类代 茚三酮试剂配制分别同文献[8]和[6]。 谢物的二维薄层色谱分析 2（D-TLC ，以往一般是分 尿液中非挥发性有机酸提取：采用改良的溶剂 萃取 法 [ 点样 量 为 5μ蘈L6cm ×6c m ぃ┗ 1μ蘈L 别暗“单 相 进 行 ，用 于 筛 测夂和 诊 断 其 先 天 性源代 谢 异 常[1～3]。用气相色谱及液相色谱 含（高效液相色谱） 12cm×12cm板），分别相当于0.1mL200g肌酐） 多相同步分析它们比较困难，而 2D-TLC分离能力 或02mL400g肌酐）尿量。 较强，结合各类化合物的特异显色定位分析，具有在 2.2 实验方法 一块薄板上完成多相同步分析的潜力。本文选用一 2D-TLC操作：其操作过程见文献[6?7] 氨基 对效果较好并有一定特色的展开剂，在同一块微晶 酸、有机酸和碱基-核苷类的标准液点样量分别为 纤维素-硅胶G混合型薄板上完成了近 100种氨基 0.1g2 4g和 1～2g；分析尿中三类代谢物时的 酸、非挥发性有机酸和碱基-核苷类的2D-TLC同步 尿提取液点样量10L?12cm×12cm板），并加点1 分离；用紫外灯-吖啶试剂-镉茚三酮试剂组合法显 ～2蘈μL未处理尿样。第一维展开完成后须在55℃下 色定位，并采用改良溶剂萃取法提取了尿液中非挥 鼓风干燥2h左右，使展开剂中叔丁醇等完全挥发。 m发o性l，有有机机酸酸。为其2分×析10灵-8敏～度5×：氨10基-8酸mo为l，碱10基-10-～核?1苷0-类1 组合显色定位：先在紫外灯 2（54nm）下观察碱 基-核苷类及部分有机酸的吸收或荧光，用铅笔轻轻 为1 10-8～3 10-8mol。 圈上；继后用吖啶试剂显色。在紫外灯下观察有机酸 的荧光 黄（绿色），用铅笔圈上，最后用镉茚三酮试剂 2 实验部分 显色氨基酸 鲜（红色）。 2.1试剂与材料 3 结果 试剂：各种有机溶剂均为国产分析纯试剂，大部 分重蒸馏提纯；作标准用的18种氨基酸、20种有机 三类化合物标准液的“单相”分离：30余种氨基 酸和20种碱基-核苷为Sigma及Merck等公司进口 酸、40余种非挥发性有机酸和20余种碱基-核苷类 产品，其他作标准用的化合物为国产色谱纯、分析纯 的2D-TLC色谱图见图1、图2和图3。其展开剂分 试剂 极（少数为化学纯）。 别是：氨基酸第一维为异丙醇 ∶乙酸 ∶乙酯