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关于哺乳动物组织蛋白酶B和组织蛋白酶H的新型抑制剂N-甲酰吡唑啉和N-苯甲酰吡唑啉的研究 作者：N.Raghav,S.Garg[印度] 古德格舍德拉大学化学系 摘要：已知组织蛋白酶、细胞内蛋白酶参与许多生理过程，降解细胞外蛋白质,激素原加工、动脉粥样硬化过程等。高浓度的组织蛋白酶已经在如关节炎，癌症和其他组织退行性疾病等表现出不同的病理条件。其中一个原因归因于高浓度作用是减少抑制浓度。因此，对小分子量化合物作为半胱氨酸蛋白酶抑制剂的鉴定工作具有十分重要的治疗意义。以相同的方向探索这项工作，我们这里给出取代物N-甲酰吡唑啉和N-苯甲酰吡唑啉的合成以及研究这些作为半胱氨酸蛋白酶的抑制剂。在作为半胱氨酸蛋白酶抑制剂的化合物的初步鉴定筛选之后，研究开展到去考虑组织蛋白酶B和组织蛋白酶H的抑制影响。SAR的研究表明，N-甲酰吡唑啉比N-苯甲酰吡唑啉更好的抑制剂。这两个系列中最有效的抑制剂是被硝基取代的化合物1i和2i用Ki值表示为1.1×10-9M和19.5 ×10 -8 M对于组织蛋白酶B，Ki值表示为5.19 ×10 -8 M 和 9.8 × 10 -7 M 对于组织蛋白酶H。对接实验表明了N-甲酰吡唑啉和N-苯甲酰吡唑啉的相互作用与酶活跃点的构建也提供了有用的见解。 引言 半胱氨酸蛋白酶是许多疾病的化疗合成蛋白酶抑制剂开发的中心。文献研究显示。组织蛋白酶B是目前为止表达数量最大的哺乳类组织蛋白酶。组织蛋白酶B表达水平增加在心脏衰竭患者中显示为在心脏疾病起到发生和发展的作用[1]。此外，组织蛋白酶B与其他像胰腺炎[2,3]骨关节炎[4]，胃癌[5]，口腔癌症转移[6]，结肠直肠癌[7]和卵巢癌[8,9]等病理状态是负相关的，蛋白酶H，氨肽酶，也与例如人纤维脑膜瘤[10]，结肠直肠癌[11]，关节炎[12]，人类前列腺肿瘤[13]和肺癌[14]等各种病理状况相关。 文献调查表明,一项大的工作已经完成，在多肽或肽基类似物作为半胱氨酸蛋白酶的抑制剂方面[15,16]。各种各样的化合物例如黄酮[17]，乙醛[18]，酰氧甲基酮[19]，环丙烯酮[20]和腈类[21]作为肽或噻二唑类[22]和环氧化物[23]也被报道作为（肽基和非肽基）组织蛋白酶B的抑制剂如图1。 图1. N-甲酰基吡唑啉类化合物和N-苯甲酰基吡唑啉取代的内源性蛋白水解酶活性在反应3 h和24 h的影响。每一条的数据表示个别化合物存在的剩余活性。控制组活性为100。 肽基抑制剂不被认为是可行用于治疗疾病，如癌症，细胞凋亡等的候选药物。由于胃癌的的不稳定性或免疫反应的可能性。同时顾及组织蛋白酶B和H在不同的非肽药物炎症和癌症环境参与反应，研究非肽药物已成为新药研发的一个重要方面[24，25]。 低分子量化合物具有不同功能也被认定为半胱氨酸蛋白酶抑制剂而且它们作为抗寄生虫药物的潜在用途[26-29]已经被报道。 吡唑核有两个芳基取代基在体外增强对于人类癌症细胞株的细胞毒性行为[30]，吡唑啉[31]也被报道具有抗细菌[32]，抗真菌[33]，抗寄生虫[34]，抗药物结合[35]，杀虫剂[36]，退热剂[37]，利尿剂[38]，抗糖尿病[39]，镇静剂[40]，肌肉松弛剂[41]，神经兴奋药[42]，抗惊厥[43]，降血压[44]，抗抑郁剂[45]，和抗肿瘤作用[46]。它们也被发现是氧化氮合酶（NOS）抑制剂，并已显示出大麻素CB 1受体拮抗剂活性[47]。 之前我们已经报道了一些缩氨基硫脲，吡唑吡唑啉作为内源性蛋白水解活性抑制剂[48-53]。最近，我们曾报道双查尔酮类化合物及其衍生物[54]；酰腙[55]，邻羟基查尔酮类化合物和他们的环化衍生品[56]作为组织蛋白酶B和组织蛋白酶H的新型抑制剂。评估吡唑啉作为抗炎和抗癌剂并且强调组织蛋白酶B和H在这些疾病环境中吡唑衍生物[57]作为这些酶的抑制剂的研究的重要性。为了实现这一努力，在本研究中我们提出早期没有报道的N-甲酰和N-苯甲酰吡唑作为组织蛋白酶B和H抑制剂的合成和筛选。 材料和方法 所有的化学品（分析级）和生化药剂石榴子GBC（邻氨基偶氮甲苯重氮盐，苯甲酰-DL精氨酸-2-萘酰胺（BANA）和亮氨酸βNA 买自Sigma化学公司。从美国或瑞士Bachem Feinchemikalien 公司。用Amicon在4-5磅的氮气压力下经过滤膜搅拌细胞YM10 将蛋白质样品浓缩，酶来自从当地屠宰场获得的新鲜羊肝。 2.1 实验程序 熔点是在开口毛细管测定所以未经校正。所有使用的化学品和溶剂是实验室级的。红外光谱被记录在Perkin Elmer光谱仪上。1 H核磁共振谱被记录在用TMS作为内标物的Bruker 300MHz的NMR光谱仪。在铝板上预涂有硅胶G（Merck）进行薄层层析并且在各种溶剂体系中用碘蒸气作为