固定化D-氨基酸氧化酶催化DL-氨基酸去消旋化制备非天然L-氨基酸.PDFVIP

　第２６卷 第２期 分　　子　　催　　化 Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．２　 　２０１２年４月 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＡＴＡＬＹＳＩＳ（ＣＨＩＮＡ） Ａｐｒ．　２０１２　 文章编号：１００１３５５５（２０１２）０２０１９２０５ 固定化Ｄ氨基酸氧化酶催化ＤＬ氨基酸去消旋化 制备非天然Ｌ氨基酸 １） 徐红梅，夏仕文 ，何从林 （重庆邮电大学 生物信息学院，重庆４０００６５） 摘　要：在过氧化氢酶和氧气存在下，固定化Ｄ氨基酸氧化酶（ＤＡＡＯ）对映选择性催化ＤＬ氨基酸中的Ｄ对映 体氧化脱氨为相应酮酸，Ｌ对映体保留．研究了ＤＡＡＯ的底物特异性并对反应条件进行了优化．结果表明：Ｄ ＡＡＯ具有较宽的底物谱，能够催化疏水性 氨基酸的Ｄ对映体氧化脱氨．在最优反应条件下，ＤＡＡＯ催化ＤＬ２ α 氨基丁酸、ＤＬ２氨基戊酸去消旋化，Ｌ２氨基丁酸、Ｌ２氨基戊酸的收率分别为４８％和４７％，ｅｅ分别为９９．５％和 ９９．８％．进一步地利用ＰｄＣ／ＨＣＯＯＮＨ催化氧化脱氨过程中产生的亚氨基酸原位还原，有效提高了Ｌ２氨基丁酸、 ４ Ｌ２氨基戊酸的收率并保持高的光学纯度． 关　键　词：固定化Ｄ氨基酸氧化酶；过氧化氢酶；氧化脱氨；ＤＬ氨基酸；非天然Ｌ氨基酸 中图分类号：Ｑ８１４．１；Ｏ６４３．３ 文献标识码：Ａ 　　非天然Ｌ氨基酸是手性药物、农业化学品和材 研究［３６］，对源于变异三角酵母（Ｔｒｉｇｏｎｏｐｓｉｓｖａｒｉａｂｉ 料的重要中间体，不能通过发酵获得．酶催化具有 ｌｉｓ）的固定化ＤＡＡＯ在制备非天然Ｌ氨基酸方面的 立体选择性高、反应条件温和、环境友好等特征， 研究相对较少． 是合成对映纯非天然Ｌ氨基酸极为有用的方法．目 我们在研究固定化 ＤＡＡＯ（Ｔｒｉｇｏｎｏｐｓｉｓｖａｒｉａｂｉ 前大量具有商业价值的非天然 Ｌ氨基酸是用酶法 ｌｉｓ）底物特异性的基础上，通过反应条件的优化， ［１］ 制备的 ．其中，外消旋体的酶催化动力学拆分是 利用固定化 ＤＡＡＯ体系和固定化 ＤＡＡＯ／ＰｄＣ／ 合成非天然Ｌ氨基酸的一个最成功的策略，涉及的 ＨＣＯＯＮＨ体系催化ＤＬ氨基酸去消旋化，高收率制 ４ 酶主要有酰化酶、水解酶等，通过 ＤＬ氨基酸酰胺 备对映纯Ｌ２氨基丁酸和Ｌ２氨基戊酸（示图１）． ［２］ 或酯的对映选择性水解，获得非天然Ｌ氨基酸 ． Ｄ氨基酸氧化酶 （Ｄａｍｉｎｏａｃｉｄｏｘｉｄａｓｅ，Ｄ ＡＡＯ）在分子氧作用下，特异地催化 Ｄ氨基酸氧 α 化为 亚氨基酸（过渡态），亚氨基酸随后自动水 α α 解为 酮酸和氨，同时释放出过氧化氢．基于 Ｄ α ＡＡＯ的催化特性，已成功用于半合成头孢菌素关键 母核７氨基头孢霉烷酸（７ＡＣＡ）的工业生产以及酮 酸的制备和氨基酸的拆分．ＤＡＡＯ和化学还原剂 的组合体系能够将氧化脱氨过程中形成的过渡态 α亚氨基酸原位转化为ＤＬ氨基酸，从而实现 ＤＬ 图示１Ｄ氨基酸氧化酶（ＤＡＡＯ）催化ＤＬ氨基酸去消旋化 氨基酸的去消旋化，提高非天然Ｌ氨基酸的收率． Ｓｃｈｅｍｅ１ＤｅｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＤＬａｍｉｎｏａｃｉｄｓｕｓｉｎｇ 在这些工作中，猪肾