美国白蛾NPV与Bt混合致病机理及其对寄主种群持续控制作用-森林保护专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 Dissertation for the Degree Studies on Infection Mechanism of HcNPV and Its Combination with Bt in Larvae of Fall Webworm, and Sustainable Control in Host Population Candidate: Duan Yanli Supervisor: Prof. Yang Zhongqi Associate Supervisor: Prof. Zhang Yongan Academic Degree Applied for: Doctorate of philosophy Speciality: Forest Protection Date of Defence : June 29,2008 Degree-Conferring-Institution: Chinese Academy of Forestry 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所 知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也 不包含为获得本研究生培养单位或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解中国林业科学研究院有关保留、使用学位论文的规定，中国林业科学研 究院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权 中国林业科学研究院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签名： 年 月 日 年 月 日 学位论文作者毕业联系方式 工作单位： 联系电话： 电子邮件： 通讯地址、邮编： 摘 要 美国白蛾核型多角体病毒（Hyphantria cunea Nucleopolyhedrovirus，HcNPV）生物杀 虫剂能有效控制寄主美国白蛾种群的数量，在生物防治中起到了重要的控害作用，具有 重要的经济、生态、环保价值，应用前景十分广阔。本文应用生物测定、组织病理切片、 电镜技术、分子生物学、免疫组化等方法，初步研究 HcNPV 与 Bt 混合致病机理及其病 毒对寄主种群中的持续控制作用，力争从多个角度揭示 HcNPV 与寄主的互作机理。主要 研究内容和结果如下： 混合感染试验表明，当两病原浓度接近LC50时，美国白蛾幼虫可表现出病毒或细菌 的症状，并依次出现细菌和病毒两个发病高峰期。用各病原浓度接近LC50混合感染，与 各单剂单独作用相比，可提前发病高峰期12-24h，表明病原混合作用可加强各病的致病 力；当Bt浓度为10、25mg/L时对HcNPV的毒力有增效作用；而Bt浓度为5mg/L时，对HcNPV 的毒力表现出减效作用；而HcNPV浓度为1.6×105、1.6×106、1.6×107 PIBs/mL时，对Bt 的毒力均有增效作用。混合感染增效可使半数致死时间（LT50）缩短0.5-2.1d。说明病原 混合感染寄主对其病原的致病性有明显影响，浓度配比是混合侵染提高效力的关键因素。 4 龄初幼虫接种后按不同时间取样，制成石蜡切片，进行 H.E 染色。观察了 HcNPV、 Bt 和 HcNPV+Bt 混合侵染寄主所引起的中肠上皮细胞、脂肪体细胞、表皮细胞、精巢的 病变过程。观察发现，病毒和细菌混合感染，6-48h 中肠上皮细胞顶端肿胀呈囊泡状，细 胞质积聚在顶部；72h-144h 表现病毒病症，与病毒单独感染相比，出现病毒症状的时间 略早，病变的程度也较严重，组织细胞降解的速度也明显加快，说明混合感染加重了病 理变化，加速了幼虫死亡。 对寄主的超微结构观察表明，Bt 感染 24h,中肠上皮细胞、杯状细胞出现病理变化， 48h 细胞质出现空泡，72h 病变加重，上皮细胞大多从基底膜脱落。混合感染幼虫，感染 24h，中肠上皮细胞出现病理变化，96h 出现病毒粒子复制，而脂肪体 24h 无明显病理变 化，48h 出现病理变化，120h 出现病毒粒子复制，至 144h-168h 中肠、脂肪体细胞核内 病毒粒子大量复制，出现包埋病毒粒子多角体，尤其中肠细胞核内充满了多角体，细胞 核胀大，几乎占满了整个细胞。HcNPV 感染精巢组织细胞核在 144h 出现病毒发生基质， 168h 有病毒核衣壳形成。上述结果表明，病毒侵染中肠细胞比脂肪体细胞早 24h，中肠 在中后期出现