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西安电子科技大学
夏玉琼
分子生物学
第五章分子生物学研究法(下)
——基因功能研究技术
第三节蛋白质及RNA相互作用技术
第四节基因芯片及数据分析
夏玉琼
11/30/2017
西安电子科技大学
2017/11/30 2
夏玉琼
目录
蛋白质及RNA相互作用技术
酵母单杂交系统
酵母双杂交系统
体外蛋白质相互作用技术
细胞内蛋白质相互作用研究
RNA干涉技术
基因芯片及数据分析
3 西安电子科技大学
夏玉琼
酵母单杂交系统
用途
研究DNA与蛋白质之间的相互作用
特点
可以识别出稳定结合在DNA上的蛋白质
再筛选DNA文库直接获得靶序列相互作用蛋白的
编码基因
另外
也可以分析鉴定细胞中转录调控因子(一种蛋白质)
与顺式作用元件(一种DNA)相互作用
4 西安电子科技大学
夏玉琼
酵母单杂交系统的基本原理
酵母转录激活结构域
转录因子
顺式元件 顺式元件 顺式元件 最基本启动子 报告基因
研究目标
转录因子是否与顺式元件结合
结构
顺式元件在启动子上游,报告基因在启动子下游
过程
转录因子与顺式元件结合,激活最基本启动子,使报告基因表达
接入三个以上的顺式作用元件,可增强转录因子的识别和结合
效率
5 西安电子科技大学
夏玉琼
酵母单杂交系统的应用
确定某个DNA分子与某个蛋白质之间的相
互作用
分离编码结合在顺式作用元件或其他DNA
位点的功能蛋白的编码基因
验证反式作用因子的DNA结合结构域
准确定位参与特定蛋白质结合的核苷酸序
列
6 西安电子科技大学
夏玉琼
利用酵母单杂交体系和已知的顺式作用元件从
拟南芥cDNA文库筛选转录调控因子
1. 选择可能会表达成转
拟南芥cDNA插入片段
录调控因子的未知基因
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