酶比活导向的新型高效安培酶电极研究-分析化学专业毕业论文.docxVIP

中文摘要酶是生物体内活细胞产生的高效高特异性生物催化剂，在生命活 中文摘要 酶是生物体内活细胞产生的高效高特异性生物催化剂，在生命活 动中发挥着无可替代的重要作用。酶传感器以酶为分子识别元件，具 有选择性好和灵敏度高等诸多优点。自Clark和Lyons于1962年首 次提出酶传感器以来，随着生物、化学、物理学、医学和电子技术等 相关学科的迅速发展，酶传感器凭借其具有其它生物传感器所无法比 拟的优势而发展成为分析化学学科中最为活跃的研究领域之一。显 然，对固定化酶进行酶活性分析和检测是评估酶固定方法优劣、优化 酶固定材料和构建新型高效酶生物传感器的重要手段和主要依据。本 学位论文中，我们简要综述了压电传感技术、安培酶电极和酶活性分 析的近期进展，基于固定化酶生物活性测试和酶固定材料和方法的优 化开展了以下研究工作： (1)考察了电化学或化学预氧化儿茶酚胺(CA)在普鲁士蓝(PB) 修饰电极上的电聚合，籍此高效包埋固定葡萄糖氧化酶(GOx)、 实现了对葡萄糖的灵敏安培生物传感。所涉及的CA包括多巴 胺(DA)、L．去甲肾上腺素(NA)和肾上腺素(EP)，详细研 究了以DA为单体的预氧化一电聚合固定酶法所构建的传感器 的性能。利用电化学石英晶体微天平(EQCM)监测了电极修 饰过程，并对几种化学预氧化剂和阳极电化学预氧化电位进行 了筛选和优化。与常规电聚合法相比，预氧化步骤明显提高了 所得传感器性能。在优化条件下所得传感器对葡萄糖的检测下 限(LOD)为0．30州，灵敏度为35心mM。1 限(LOD)为0．30州，灵敏度为35心mM。1 cm～，稳定性和 抗干扰性好，且在．0．05 V检测电位下亦有优良分析性能。紫外 可见光谱法和EQCM法检测结果证实所固定的GOx酶比活性 (ESA)高，基于NA聚合物的酶膜性能与DA聚合膜的基本 相当，但EP聚合低效且其酶膜的生物传感性能差。 (2)K3Fe(CN)6快速化学氧化DA和NA产生相应的化学氧化聚合物 (PDAc和PNAc)并同时有效包埋GOx。将该酶一高分子复合 物滴干于金电极表面，并用壳聚糖(CS)进一步固定构建了高 性能生物传感器和生物燃料电池(BFC)。所得 CS／PDAc—GOx／Au酶电极对葡萄糖灵敏度高(135 t．tA mM。1 cm‘2)、LOD低(0．07 gM)、响应时间短(小于3 s)、抗干扰 能力好。而且，该传感器热稳定性良好，在30 oC下使用寿命 达两个月，在60 oC下寿命为三周。此外，该传感器在以苯醌 (BQ)或二茂铁甲酸(Fc)为电子媒介体的第二代传感模式下 亦具有良好的分析性能，BQ和Fc的使用极大地拓宽了该传感 器的线性范围(对BQ为2．0 1．tM-48．0 mM，对Fc为2．0灿仁16．0 mM)并显著提高了葡萄糖饱和电流密度(高达8．0 mA em乏)。 利用这些人工电子媒介体在酶膜中良好的渗透性，我们根据已 有动力学模型对所固定的GOx及其酶活进行了定量分析，结果 表明CS／PDAc—GOx／Au电极上实现了酶的高负载量、高活性固 定。同时，CS／PDArGOx／Au作为生物阳极构建的BFC最大功 率密度达1．62 mW cm～，优于目前所报道的大多数BFC。 Il (3)结合DA易吸附易聚合的性质和多壁碳纳米管(MWCNTS)的 (3)结合DA易吸附易聚合的性质和多壁碳纳米管(MWCNTS)的 高导电性，以GOx为模型酶，在磷酸缓冲液(PBS)中合成 DA-MWCNTs—GOx复合物并通过过量DA的电化学氧化聚合 实现了GOx在石英晶体微天平(QCM)金电极表面的高效固 定。结果表明，导电纳米材料MWCNTs的引入改善了DA单体 在电极表面的电沉积，实现了酶的高效包埋。同时，不导电聚 多巴胺膜(PDA)赋予了该传感器优良的抗干扰能力。所制备 的PDA—MWCNTs—GOx／Au酶电极对葡萄糖的检测灵敏度高 (60±3．2心mMJ cm。2)、LOD低(O．20 gM)、线性范围宽且 抗干扰能力强。 (4)活性蛋白(如酶)在界面的吸附在科研、工业和医学等领域具 有广泛意义。吸附酶的构象和取向将显著影响吸附酶性能。因 此，通过控制吸附条件实现对吸附酶性能的有效调控在众多领 域都具有重要应用价值。本章采用EQCM和紫外可见光谱法研 究了GOx在裸金电极和多种短链巯基化合物(R-CH2．SH，R= ．CH3，．CH20H，．COOH或一CH2M{2)修饰金电极上的吸附，同 时对所得吸附酶的酶活性及酶与电极间的直接电子传递进行了 研究。实验结果表明通过增大吸附液中离子强度和适当降低酶 浓度能显著改善吸附酶的活性。优化条件下，在电极表面可吸 附固定同时具有高酶活性和高电活性的酶。 (5)重金属(蹦)离子与酶的相互作用是许多领域的重要