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大肠杆菌转化实验报告 　　大肠杆菌转化实验　　大肠杆菌转化可以：将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；验证大肠杆菌感受态细胞效果；用于分子生物学其他研究。1原理：　　质粒DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。　　2器材：　　旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴，制冰机，恒温摇床，培养皿，超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。　　3材料和试剂：　　质粒DNA，重组DNA，培养基，LB培养基，无菌ddH2O，IPTG，X-gal。　　4实验准备：　　无菌ddH2O，离心管装入铝制饭盒、移液器吸头装入相应的吸头盒，20%IPTG，2%X-gal。　　5操作步骤：　　事先将恒温水浴的温度调到42℃。　　从-70℃超低温冰柜中取出一管感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴5~10min。　　加入10μl连接产物，轻轻震荡后放置冰上20min。　　轻轻摇匀后插入42℃水浴中90秒进行热休克，然后迅速放回冰中，静置3~5min。　　在超净工作台中向上述各管中分别加入900μlLB培养基轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡30min到50min　　在超净工作台中取上述转化混合液100~300μl，分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。　　如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40μl2%X-gal，8μl20%IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。　　在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30-60min直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。　　在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。　　观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。　　海洋学院　　综合大实验报告　　专业：生物技术班级生技131班姓名：gsq学号：XX题目：生物技术大实验　　指导教师：安贤惠、孙玉英学年　　XX年5月24日--XX年6月3日　　分离　　划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。　　涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。　　制备LB培养基　　1、配方：蛋白胨克，牛肉膏，氯化钠克，水1000ml　　2、流程　　计算称量　　倒平板　　溶解调pH分装加塞，包扎灭菌　　培养基配制(特)　　培养基应现配现用，每次配置350ml，一次性使用完毕。　　1、按下表称取物资配置LB培养基到500ml锥形瓶中：　　2、用双层铝箔和棉绳对锥形瓶进行封口，摇晃锥形瓶以使各物质迅速、均匀、完全、　　溶解。待灭菌。　　①分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用____。　　②加塞：试管用塑料盖或__棉花塞___；三角瓶口用_封口膜__或_6层纱布封口,再用__牛皮纸__或报纸封口。　　③包扎：用_牛(转载于:写论文网:大肠杆菌转化实验报告)皮纸__或报纸　　④灭菌：高压蒸气灭菌法1）加水：向外层锅内加入适量的水，加水的要求是不触及内胆_.　　2）装锅：物品放置的要求__：加盖：将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_排气槽__内。再以__两两对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。3）加热排气：打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀。4）保温保压：当锅内压力升到1_kg/cm2时，控制热源，维持压力至。5）出锅：切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力降至_0_时，打开_排气阀__，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至使容器爆炸。　　灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80℃_烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_污染_。⑤倒平板、制斜面　　操作平台：超净台　　灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开__紫外线_和_过滤风，灭菌30min.　　倒平板：待培养基冷却至__℃时，将每只培养皿倒入__ml未凝固的固体培养基，置于_水平_位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。_倒置_备用。　　制斜面：将未凝固的固体培养基的试管斜放，冷却待凝使即成为斜面。　　思考题：　　一、操作过程中避免带入杂菌的方法有哪些？　　1、灭菌后的培养基、器具置于超净台上，并打开超净台的紫外灯和过滤风，灭菌30分钟。　　2、用镊子夹出洒精棉球擦