基于磁分选技术和间接免疫荧光技术的肺癌6AS.pdf

第 卷第 期 上海师范大学学报 自然科学版 年 月 基于磁分选技术和间接免疫荧光技术的 肺癌 细胞的分离检测 周朝辉 付聪颖 贾能勤 上海师范大学生命与环境科学学院上海 摘要 采用磁分选技术及间接免疫荧光技术分离检测肺癌循环肿瘤细胞将表皮生 长因子受体抗体连接到四氧化三铁 磁珠表面构建免疫磁珠 通过抗体和肺癌 细胞的表面抗原的特异性结合将免疫磁珠与肺癌细胞结 合通过磁场作用使肺癌细胞在磁场的作用下从混合细胞中分离富集分离出的细胞利用间 接荧光技术在其细胞表面连接结合 荧光团的特异性抗体并用二脒基苯基吲哚 对细胞核染色以定位细胞位置通过倒置荧光显微镜的观察从而实现对肿瘤细胞的 定量计数检测实验结果显示该方法对肺癌 细胞具有较好的检测灵敏度和检测下限检 测下限可达 关键词 循环肿瘤细胞 磁分选技术 免疫荧光技术 肺癌 细胞 中图分类号 文献标志码 文章编号 收稿日期 基金项目 国家自然科学基金面上项目 上海教委创新计划项目 作者简介 周朝辉 男助理实验师主要从事纳米生物技术方面的研究 通信作者 贾能勤 男教授主要从事纳米生物技术生物电化学生物传感器等方面的研究 上海师范大学学报 自然科学版 年 引言 循环肿瘤细胞是从肿瘤组织脱落通过血液循环系统远离肿瘤组织的 一类肿瘤细胞其中大部分的循环肿瘤细胞在循环系统中被吞噬或者凋亡只有少数的细胞转移并发展 成转移灶形成新的肿瘤组织恶性肿瘤细胞通过血液转移到身体的其他器官而的转移是造成 肿瘤患者死亡的主要原因 因此循环肿瘤细胞的早期诊断及治疗对于患者的预后判断疗效评价 和个体化治疗都具有重要的意义 在肿瘤病人外周血的含量极少一般 血液中只有 个细胞这对检测系统是 一个巨大的挑战 需要高敏感性可重复性可靠快速便宜的富集手段才能解决这个问题目前 的富集技术主要根据免疫亲和性物理性质和直接分析这三类技术来进分离富集 免疫磁珠 法是免疫亲和性的一种方法的富集主要是利用捕获抗体和抗原之间的高度特异性反应免 疫作用促使抗原与耦合到磁珠的抗体发生特异性的结合然后抗原抗体复合物被置于磁场作用之下 通过磁场对免疫磁珠固定从而使与其他血液细胞分离产生富集效果 目前已经开发了大量的技术用于检测其中有些已经成功的用于测试或者临床评估 现有 的检测技术主要包含免疫细胞化学 多聚酶链反应 逆转录聚合酶链反应 流式细胞 术 等免疫细胞化学检测方法是基于抗原抗体结合反应的原理利用单克隆抗体 与特异的肿 瘤标记物结合并通过酶与底物反应显色来判断肿瘤细胞的存在检测的肿瘤标志物主要分三类 上皮细胞角蛋白如 上皮细胞膜特异性抗原如黏蛋白类包括上皮膜抗原人 乳球蛋白等 肿瘤相关糖蛋白如目前这些检测技术仍然存在检测限不够 低检测方法易出现假阳性和假阴性等问题 免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理先将已知的