慢性饮酒对小鼠胆红素清除及结构型雄甾烷受体表达的影响-内科学（消化）专业毕业论文.docxVIP

慢性饮酒对小鼠胆红素清除及结构型雄甾烷受体表达的影响 慢性饮酒对小鼠胆红素清除及结构型 雄甾烷受体表达的影响 中文摘要 目的 研究酒精性肝病模型小鼠肝内外胆红素清除通路变化以及胆红素代谢调控因 子结构型雄甾烷受体的表达情况，探索CAR激活对ALD小鼠胆红素清除的作用， 探讨慢性酒精摄入对胆红素清除的作用与CAR可能的相关性。 方法 1-酒精组和对照组小鼠分别喂以Lieber-DeCarli液体酒精(w／v)饲料以及等热卡 的对照饮食，构建酒精性肝病模型小鼠。酒精组小鼠腹腔注射CAR激动剂苯 巴比妥(DMS0溶解)或DMSO(阴性对照)，即分为对照组、酒精组、酒精+PB 组、酒精+DMSO组。 2．摘眼球取血，检测ALT、AST、ALP、总胆红素、直接胆红素等生化指标。 3．切取部分肝组织，行苏木精一伊红染色(H＆E)及油红染色，观察肝组织病理 变化。 4．采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测胆红素肝内及肝外清除通路 OATPlAl、OATPIA4、OATPlB2、UGTlAl、MRP2表达以及结构型雄甾烷 受体CAR核内蛋白及总蛋白的表达。． 5．采用Trizol提取肝肾总RNA，RT-PCR检测胆红素清除通路 Oatplal，Oatpla4,Oatplb2,Ugtlal，Mrp2以及结构型雄烷受体CarmRNA表达． 6．培养正常小鼠肝细胞系NCTCl469，取相同代数的肝细胞随机分为正常组、酒 精组、PB组、PB+酒精组。采用免疫荧光法观察CAR在细胞内的分布情况。 结果 1．成功建立酒精性肝病小鼠模型，检测血清生化指标示：与对照组相比，酒精 组ALT、AST、ALP、胆红素均升高(尸值均0．05)；PB激活CAR后，与酒精 +DMSO阴性对照相比，酒精+PB组总胆红素水平下降(PO．05)，差异有统计 学意义； 2．H＆E、油红染色可见酒精组肝细胞肿大，气球样变，细胞核固缩，肝细胞大 疱性、小疱性脂肪变性，酒精+PB组脂肪变性等病理损伤显著改善。 3．RT-PCR结果显示：与对照组比较，酒精组肝肾OATPlAl、肝MRP2 mRNA表达 显著减少，葡萄糖醛酸化酶UGTlAl mRNA表达增多(尺0．05)；与阴性对照组 相比，酒精+lab组肝内Oatplal，Oatpla4,Ugtlal的mRNA表达明显增多(P值 万方数据 温州医科大学硕士学位论文均0．05)，肾脏OATPIAI，OATPIA4，MRP2转运体mRNA改变均不明显(尸值 温州医科大学硕士学位论文 均0．05)，肾脏OATPIAI，OATPIA4，MRP2转运体mRNA改变均不明显(尸值 均O．05)。 4．Western blot结果显示：与对照组比较，酒精组肝肾OATPIAI、肝MRP2蛋白 表达显著减少，葡萄糖醛酸化酶UGTIAI蛋白表达增多(尺0．05)，肝CAR总 蛋白未见明显改变(乃O．05)，而CAR核蛋白明显抑制，其表达量是对照组的 60％(尺0．05)；与阴性对照组相比，酒精+PB组肝内UGTIAI蛋白表达显著增 加。是阴性对照组的2倍(尺O．05)。肾脏OATPIAI，OATPIA4，MRP2转运体 蛋白改变均不明显(乃0．05)，肝CAR总蛋白未发生改变，而肝CAR核蛋白表 达增多，增加1．6倍(必0．05)。 4．免疫荧光法检测CAR在细胞内的分布，结果示：与空白对照组相比，酒精组 细胞核内的红色荧光强度较低。PB组细胞核内的红色荧光强度显著增加， PB+酒精组细胞核内的红色荧光强度明显减弱。 结论 1．长期慢性饮酒导致胆红素清除障碍，诱导UGTIAI表达，抑制肝肾胆红素相关 转运体OATPIAI、肝MRP2表达，其中抑制作用可能与胆红素调控因子CAR核 内转位损伤有关。 2．CAR激活剂PB调控CAR进入细胞核，促进ALD小鼠胆红素清除，选择性诱导 胆红素相关转运体OATPIAI、UGTIAI表达，拮抗酒精对胆红素调控因子CAR 核内转位的抑制作用。 关键词酒精性肝病；胆红素；有机阴离子转运多肽；葡萄糖醛酸转移酶；结构 型雄甾烷受体 万方数据 兰型墨型奎兰堡主兰垡丝壅Effects 兰型墨型奎兰堡主兰垡丝壅 Effects of chronic alcohol consumption on the bilirubin clearance and constitutive androstane receptor expression Abstract objective To investigate hepatic and extrahepatic bilirubin clearance pathway and bilirubin regulatory factor constitutive androstane re