马铃薯青枯病抗性相关基因的分离及其功能分析-蔬菜学专业毕业论文.docx

与LD．PCR方法和cDNA文库相结合，快速获得了三个具有完整开放阅读框架基因的全长cDNA 与LD．PCR方法和cDNA文库相结合，快速获得了三个具有完整开放阅读框架基因的全长cDNA (受用、StPMEI和StDnaJ)和四个抗病相关基因(zJJ、L77’L181和耶62)cDNA的5’和3’RAcE 的PcR产物，同时研究了这些基因的诱导表达。具体为： StPI编码116个氨基酸，与马铃薯蛋白酶抑制子I前体cDNA有较高的同源性(核苷酸和 氨基酸序列的同源性分别为89％和74％)。该基因受青枯病菌的诱导和JA的调节，均为上调。 推测StPl基因是马铃薯蛋白酶抑制子基因家族的重要成员，在马铃薯的抗青枯病的反应中可能具 有重要作用。该基因已在GenBank注册，序列号为DQ822994。 StPMEI编码198个氨基酸，与烟草果胶甲脂酶抑制子基因具有较高的同源性(核苷酸和氨 基酸序列的同源性分别为85％和78％)。StPMEI基因的表达受青枯病菌侵染的抑制，可能与病 菌侵染早期促使果胶甲脂酶(PME)表现活性，加固细胞壁有关；但该基因又受JA的诱导可能 与病菌侵染后期细胞肇的扩展和新细胞壁的建立有关。该基因已在GenBank注册，序列号为 DQ822993。 StDnaJffi码177个氨基酸，与拟南芥DnaJdlke基因的部分核苷酸具有84％的一致性，与其编码 的氨基酸序列具有59％的一致性。该基因受青枯病菌的诱导，也受JA的调节。但JA诱导后其上调 表达明显比青桔病菌诱导提前，且其维持高表达水平的时间也明显缩短。该基因已在C,eaBank注 册，序列号为DQ885360。 LSI(methyl-CpG-bindingdomain-enntainingprotein)和L77(putativelyencoding receptor-like kinase RHGl)均受青枯病菌的诱导，但它们的受诱导速度不同。L5j在6-12d、时内表达最即达到 最高；L77约需48小时才可达到最高表达量。这两个基冈均不受JA的调节。 L181(phosphata∞2C)同时存在于抗病基因璎和感病基因型中，在抗病基因型EDt3中受青 枯病菌的诱导下调表达，与此相反却受JA的诱导上调表达；在感病基因型ED25中，该基因不受JA 调节。预示着对于L181而言，病菌处理和JA刺激可能采用不同的调节途径，并且该基因在抗病材 料中因受诱导下调表达而参与抗病反应。 妇62(proteinkinasePtil)同时受青枯病菌的诱导和JA的调节，其表达模式与StDnaJ相似， 均为上调表达。在处理24小时之前该基因的mRNA积累晕即达到最高，并且L362在JA诱导后 其上调表达明显比青枯病菌的诱导提前。Ptil基因为Pto基冈的下游基因，参与番茄的抗病反应， 推测1．362也可能参与了马铃薯的抗青枯病反应。 总之本研究不仅为我们提供了一些有益的数据(EsTs)，还有助于提高我们对马铃薯与青枯 病菌互作本质的认识，并且有些EST将可能被转化为分子标记进行马铃薯抗青枯病的标记辅助育 种。 关键词：马铃薯青枯病，eDNA文库，抗病相关基因，基因表达 Ⅱ AbstractPotato(SolanumtuberosumL．)asooeoftopfourimportantcropsintheworld Abstract Potato(SolanumtuberosumL．)asooeoftopfourimportantcropsintheworld afterwheat,tom and rice。plays more and more important role in food secudty．Bacterial wilt caused by Ralstonia solanacearum(J妇)is one of devastating diseases of potato．As soil-borne disease,there no any efficient chemical methods to control it．Probably，the most promising way is to deveiq，resistant cultivars．During the past years，research mainly focused pathology，taxonomy and epidemiology of the pathogen．The genetics of host resistance and the mechanism of potato-Rs interaction along with regulation of gene expressi