双交联法制备桔霉素鄄蛋白质偶联抗原及抗体.pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2010, 37(3): 337~341 交联法制备桔霉素 蛋白质偶联抗原及抗体* 1) 2) 1, 2)** 汪媛媛 李泳宁 郭养浩 1) 2) ( 州大学生物科学与工程学院，福州350002； 福建省医疗器械与医药技术重点实验室，福州350002) 摘要 以1, 4- 丁二醇二缩水甘油醚(双环氧试剂)为偶联剂，合成桔霉素- 蛋白质偶联抗原CIT-BSA，经过HPLC 分析、紫外 扫描和红外光谱鉴定表明，偶联物成功制备，CIT/BSA 的偶联比为8.16 通过免疫BALB/C 小鼠，获得抗桔霉素多克隆抗 5 体，经间接ELISA 检测，效价达到 1.1 10 间接竞 ELISA 表明，桔霉素(CIT)的最低检测浓度为10 滋g/L ，其线性范围为 10～250 g/L ， 为100 g/L 分析了不同方法制备的偶联抗原的免疫原性，实验表明，桔霉素抗原决定簇C 位置的羧基 滋 IC50 滋 7 保留是获得针对桔霉素特异性抗体的必要条件 为快速检测桔霉素的酶联免疫检测技术的建立和检测试剂盒的研制提供技术 依据 关键词 1, 4- 丁二醇二缩水甘油醚，桔霉素，抗原，抗体 学科分类号 R392，Q51，Q813 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00525 桔霉素(CIT)是由青霉菌属和曲霉菌属的某些 [1] 1 材料与方法 菌株产生的真菌毒素 桔霉素具有严重的致畸、 致癌和诱发基因突变等作用，人和动物食用含有桔 1.1 材料 [2] 霉素的食物后会造成肝肾损伤 近年来的调查研 桔霉素(citrinin，CIT)， 氏佐剂购自 Sigma 究发现，许多食品和农产品中都可检测到桔霉素， 公司；牛血清白蛋白(BSA) 为Solarbio 公司产品； 在大部分红曲发酵产品中，桔霉素含量高达欧盟标 卵清蛋白(OVA) 为Worthington 公司产品；四甲基 准的几十到几百倍 桔霉素引起的食品安全问题越 联苯胺(TMB)为TIANGEN 公司产品；HRP 标记羊 来越受到人们的关注 抗鼠IgG 购自Thermo 公司；G-25 凝胶为Solarbio 桔霉素的分析检测方法主要有酶联免疫吸附法 公司产品；1, 4- 丁二醇二缩水甘油醚(1, 4-butanediol (ELISA) [3] 、薄层层析法(TLC)[4] 、高效液相色谱法 diglycidyl ether) 为Alfa Aesar 公司产品 其他试剂 [5] [6] (HPLC) 和毛细管电泳分析 等 TLC 和HPLC 是 均为分析纯 最常用的方法，但处理繁琐，检测时间长 1.2 方法 酶联免疫检测法具有特异性强、灵敏度高、检 1.2.1 桔霉素- 蛋白质偶联抗原的制备方法 测时间短等特点，被广泛应用于各种霉菌毒素的检