米氏凯伦藻溶血毒素和细胞毒素的分离纯化与毒性研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

一甥嬲 一甥嬲～～ 厦门大学学位论文著作权使用声明 本人同意厦门大学根据《中华人民共和国学位条例暂行实施办法》 等规定保留和使用此学位论文，并向主管部门或其指定机构送交学位 论文(包括纸质版和电子版)，允许学位论文进入厦门大学图书馆及 其数据库被查阅、借阅。本人同意厦门大学将学位论文加入全国博士、 硕士学位论文共建单位数据库进行检索，将学位论文的标题和摘要汇 编出版，采用影印、缩印或者其它方式合理复制学位论文。 本学位论文属于： ( )1．经厦门大学保密委员会审查核定的保密学位论文， 于 年 月 日解密，解密后适用上述授权。 ／ (V／)2．不保密，适用上述授权。 (请在以上相应括号内打“√”或填上相应内容。保密学位论文 应是已经厦门大学保密委员会审定过的学位论文，未经厦门大学保密 委员会审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写的，默认 为公开学位论文，均适用上述授权。) 声明人(㈣：匆辨 ∞f甲年对月步日 目录摘要 目录 摘要 I Abstract ．．．．．．．．． ．．．．． ．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．III 第—章前言 。1 1．1芴}潮 ．1 1．1．1赤潮 ．．1 1．1．2赤潮毒素 3 1．1-3赤潮毒素的检测方法 5 1．1．4中国近海赤潮爆发状况 6 1．2米氏凯伦藻及其毒素 。7 1．2．1米氏凯伦藻 7 1．2．2溶血毒素 ．10 1．2．3细胞毒素 ．13 1．3斑马鱼模式生物 14 1．3．1斑马鱼的研究背景 ．14 1．3．2斑马鱼及其胚胎在毒理学方面的应用 ．16 1．4立题背景 18 第二章材料与方法 。19 2．1实验相关材料和试剂 19 2．2实验室主要仪器 ．20 2．3部分试剂配方 。21 2．4米氏凯伦藻培养及鲍鱼毒理实验方法 22 2．4．1藻的培养 ．22 2．4．2鲍鱼的毒理实验 ．23 2．5毒素分离纯化相关实验和方法 24 2．5．1米氏凯伦藻粗提物的有机萃取 ．24 2．5．2正相硅胶分离纯化 2．5．2正相硅胶分离纯化 ．24 2．5-3反相C．18柱中压分离纯化 25 2．5．4 TLC分离方法 26 2．5．5高效液相色谱(HPLC) 一26 2．2．6化合物结构鉴定方法 27 2．6溶血毒素毒性研究方法 27 2．6．1溶血毒素兔血红细胞实验 ．27 2．6．2粗提物的斑马鱼胚胎毒理实验 ．28 2．7细胞实验方法 29 2．7．1细胞培养 ．30 2．7．2细胞存活率测定(MTT实验) 30 2．7．3细胞凋亡检测Alexa fluor-488 Annexin．v／PI双染法 ．．31 2．7．4细胞毒素对肿瘤细胞的细胞周期抑制实验 ．33 第三章结果与分析 35 3．1米氏凯伦藻的培养密度 ．．35 3．2米氏凯伦藻对鲍鱼的毒性作用 ．35 3．3粗提物抑制斑马鱼胚胎发育结果 36 3．4溶血毒素的结构是一种油脂酰胺化合物 ．38 3．5溶血毒素对兔血红细胞的溶血活性测定 40 3．6细胞毒素抑制肿瘤细胞的生长周期 ．41 第四章讨论 。47 参考文献 ．50 附录1缩略词与中英文对照 57 附录2鲍鱼鳃部透射电镜图片 58 致{射．． ．．．．．． ． ． ．． ．．．．．．．． ．．．．．． ．． ．．59 II Table Table of Contents Abstract in Chinese． ．． ．． ．．．． ． ．．．． ．． ．．I Abstract in English ． ． ．．．．III Chapter 1 Introduction． ．． ．． ．．．．． ．．．．．．．． ． ．．． ．．1 1．1 Red Tide ．1 1。1．1 RedTide ．1 1．1．2 Varietyoftoxins fromRedTide．． ．3 1。1．3 Methods ofdetecting toxins from harmful algas ．5 1．1．4 HarmfulAlgal Blooms in China sea ．．6 1．2 Karenia mikimotoi and toxins ．．7 1．2．1 Karenia mikimotoi ． ．． ．．．．． ． ．．．．．．．．．． ．．7 1．2．2 Hemolytic toxin ．． ．．．． ． 10 1．2．3 Cytotoxin．．．．． ． ． ．．． ．．1 3 1．3 The model organisms zebrafish ··14 1．3．1 The backgroud ofzebrafis