脉冲电磁场对去势大鼠骨代谢影响的实验研究-骨外科学专业毕业论文.docxVIP

中英文缩略词对照表英文缩写 中英文缩略词对照表 英文缩写 英文全称 中文全称 oP Osteoporosis 骨质疏松 BMD Bone Mineral Density 骨密度 oVXRat Ovariectomized Rat 去卵巢大鼠 oB 0steoblast 成骨细胞 oC Osteoclast 破骨细胞 TRAP Tartrit-Resistant Acid 抗酒石酸酸性磷酸 Phosphatase 酶 ALP Alkaline Phosphatase 碱性磷酸酶 ACP Acid Phosphatase 酸性磷酸酶 DM瞳M Dulbecco’S Modified Eagle’s 杜尔伯克改良基础 Medium 培养基 PBS Phosphate—buffered Saline 磷酸盐缓冲液 FBS Fatal Bovine Serum 胎牛血清 dl毛O Deionized Water 去离子水 RANase Ribonucleic Acid Enzyme 核糖核酸酶 DNA Deoxyribonucleic Acid 脱氧核糖核酸 oD Optical Density 光密度 PI Propidium Iodide 碘化丙啶 SABC Strept Avidin-Biotin Complex 链酶素一生物素．酶复 合物 EDTA Ethylenediaminetetraacetic Acid 二乙胺四乙酸 DMSo Dimethyl Sulfoxide 二甲亚砜 Ver Verapamil 维拉帕米 FCM Flow Cytometry 流式细胞仪 摘 摘 要 研究背景 研究表明，成年女性在绝经后，由于卵巢功能衰退，内源性雌激素 分泌减少，骨组织中细胞所处的物理及化学徽环境发生改变，骨形成和 骨吸收平衡失调，使得骨质丢失多于骨形成，最终导致骨质疏松的形成 Ⅲ。业已证实，脉冲电磁场(PEMF)能够加速骨折愈合，促进部分延迟 愈合或者不愈合的骨折端在保守治疗下再次生长达到愈合圆。既然PEMF 能够促进骨折愈合，那么，对于雌激素缺乏所造成的骨质丢失，PEMF 是否具有逆转作用，是值得探讨的课题。 研究目的 PEMF在体外对成骨细胞一破骨细胞体系的作用及其机理，探讨 PEMF对发生骨质疏松的去势大鼠骨的生物学作用，为临床应用PEMF 治疗和预防骨质疏松提供实验依据。 材料与方法 1．应用形态学、特异性酶染色及免疫细胞化学技术，对培养的成骨 细胞及破骨细胞进行鉴定。 2．应用对硝基苯酚法测定在PEMF作用后的成骨细胞．破骨细胞共 育体系中成骨细胞碱性磷酸酶活性(ALPase)；应用流式细胞仪技术检测 PEMF对成骨细胞周期及细胞凋亡的影响；应用图象分析技术分析PEMF 对成骨细胞矿化功能的影响。 3．通过荧光标记，应用流式细胞仪检测PEMF对成骨细胞细胞膜电 位及细胞内钙离子浓度的影响。 4．通过H—E染色、四环素标记和I型胶原SABC法免疫组化技术分 析处理组和对照组组织学的改变；通过图象重组分析技术检测各组骨小 梁空间结构的变化。 5．通过骨密度仪检测各组骨密度的变化；通过生物力学测试仪检测 各组生物力学的变化。 6．统计分析：采用SPSS 10．O固软件包。计量资料，采用配对t检验 及方差分析检验各组间差异的显著性，组问比较用LSD方法；计数资料， 卡方检验。 结果1．成骨细胞呈长梭形或三角形贴壁生长，HE染色可见细胞胞体较大， 结果 1．成骨细胞呈长梭形或三角形贴壁生长，HE染色可见细胞胞体较大， 边界清晰，胞浆呈深红色，细胞突起的长短与数量不等，胞核偏位、呈 圆或椭圆形、偶有双核型，核染色质深、呈粗糙疏松网状，核仁1～2 个，呈蓝色；I型胶原免疫细胞化学染色阳性及碱性磷酸酶染色阳性为 成骨细胞的特征性表现，从而可鉴定培养细胞为成骨细胞。破骨细胞呈 多角形，HE染色培养初期呈单核形态，核大居中，后期胞核逐步融合呈 多核巨细胞形态，胞浆内有许多嗜酸性颗粒，细胞膜有较多的伪足样突 起，抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性及与骨片共育可消化骨片形 成骨陷窝为破骨细胞的特征性表现，从而可鉴定培养细胞为破骨细胞。 2．经PEMF作用后培养上清液中的碱性磷酸酶活性升高，成骨细胞 周期发生改变，G2+S期细胞百分比增高，即DNA合成和细胞分裂增加， 成骨细胞大量自然增殖，而同时细胞自然凋亡减少，共育体系成骨细胞 室矿化率增加，成骨细胞矿化功能明显提高。 3．在行PEMF处理前成骨细胞细胞膜电位及细胞内钙离子浓度稳 定在一定基线水平(荧光强度无变化)，而在PEMF作用后，细胞膜电位 出现去极化；细胞内钙离子浓度升高。PEMF使细胞出现去极化的效应 能被钠通道阻断剂河豚毒素所阻断，而钙通道阻断剂维拉帕米对其没有 明显的影响；