补肾活血中药对去势大鼠骨质疏松作用的分子生物学机制-VxEmpire.DOC

注意： 拟进行两种受体、组织蛋白酶K 、IL-6四项指标检测。 “立论依据部分”宜论述四者之间的联系，并强调补肾活血中药与四者的关系（已有的及很可能的）。重新排参考文献顺序（以10篇为好）。 时间三年为好。自2002年1月1日至2004年12月31日。 参加人员明天再定。 已有条件要写清楚设备名称。 请与卢老师联系索要我的个人情况（在电脑里） 请抓紧时间，继续努力。 补肾活血中药对去势雌鼠骨质疏松抑制作用的分子生物学基础研究 二、立论依据（包括项目的研究意义、国内外研究现状分析） 以淫羊霍等为代表的补肾药物防治骨质疏松症的临床研究取得了较好的效果[1]。我们应用补肾活血中药治疗绝经后骨质疏松症，进行了为期6个月的前瞻性、随机双盲、安慰剂对照和阳性对照的临床研究，益骨胶囊可以有效治疗PMO，改善PMO病人主要的症状如：骨痛、活动连续时间和筋挛拘急等；研究采用的其它疗效指标显示益骨胶囊是有效的，表现在BMD的提高、骨形成指标的升高、骨吸收指标的下降、性激素水平的提高、骨折发生率的降低等；研究还显示，在服用益骨胶囊6个月期间未见明显可能相关的毒副反应[2]。补肾活血液对抗切除卵巢诱导的SD大鼠OP模型的骨质改变，对模鼠OP有明显的抑制作用，主要体现为刺激衍化成骨细胞，作用于骨形成环节[3]。去睾大鼠的骨密度和骨的抗折能力明显低下，补肾活血液能够在增加去睾大鼠BMD的同时，改善骨的韧性和抗扭转效能。补肾活血液可以降低SD雄鼠增龄性的骨丢失率，并升高增龄大鼠的全身BMD及增加股骨抗弯强度。对地塞米松诱导的雄性大鼠OP，在造模的同时进行预防性给服补肾活血液，可使已经减少的全身BMD和已经降低的骨抗弯强度恢复至正常水平；模型复制之后给服中药，可以部分恢复已经减少的全身BMD和已经降低的股骨抗弯强度。这些作用的分子生物学基础有待深入探讨[2]。 近年来，关于雌缴素受体（ER），维生素D受体（VDR）、细胞因子。组织蛋白酶K，C-fos转录因子，I型胶原蛋白等与骨质疏松关系的研究受到重视。 雌激素的降低是绝经后妇女骨质疏松发生的主要原因[4]，雌激素通过ER在骨代谢中起作用，ER的表达依赖于雌激素的存在，实验发现去势雌鼠的ER表达水平明显降低。在调控骨代谢的激素中，VitD是重要的调节激素之一，已知VitD的生理效应是通过与成骨细胞内的VDR结合，反馈作用于骨钙素，从而促进骨的转化[5]。即骨钙素基因可被VDR激活，且激活的程度与细胞内的受体数目有关。 近几年研究发现组织蛋白酶K，L（Cathepsin-K,L）主要在骨破骨细胞中选择性、特异性地表达，参与骨吸收的调节，从而与骨质疏松等骨质减少性疾病有关。[6，7]最新研究结果表明在破骨细胞中高度表达的酶是组织蛋白酶K[8]，这说明CK可能是调节骨吸收的主要蛋白酶。最近亦有报道CK可能是哺乳动物组织中唯一能降解骨胶质的蛋白酶[9]。故CKmRNA表达的高低可反映骨吸收活动的强弱。而由原癌基因C-fos编码的C-fos，参与转录因子AP-1的组成，调节细胞的生长分化。C-fos的成骨细胞增殖期高表达，影响成骨细胞的增殖，分化，尤其与成骨细胞（OB）的增殖激活密切相关。[10-11]近几年，体内外实验及转基因动物研究发现，C-fos表达对骨转换有重要意义。已有实验证明，PTH、PGI2、IGF、TGFβ均诱导C-fos原癌基因的表达，同时这些因子又影响成骨细胞的增殖，且用C-fos反义核苷酸能阻断TGFβ的致有丝分裂作用。严格控制C-fos的表达对正常骨代谢很重要[12]。缘于骨形成主要是骨胶原的合成和钙化，I型胶原的表达及合成同样与骨形成活性密切相关[13]。胶原蛋白其基因表达水平不仅表示骨转换的高低，而且还表示骨形成过程的速度[14]。因此C-fos转录因子的表达和I型胶原mRNA的表达，从转录水平来反映骨形成，则更加直接和敏感。 现今有关细胞因子在骨代谢过程中作用的研究也越来越引起广泛的重视，其中促进骨形成的细胞因子主要有胰岛素样生长因子I（IGF-I），生长转化因子β（TGF-β）成纤维细胞生长因子（FGF）等；促进骨吸收的细胞因子主要有白细胞介素I（IL-1），白细胞介素6(IL-6),白细胞介素11（IL-11），肿瘤坏死因子等等。这些因子相互影响，作用于骨吸收和骨形成中的各个环节，在维持骨的动态平衡，构成骨的偶联中起着重要的作用。国内学者对各个细胞因子的作用机制，如其基因表达，受体蛋白等都已作了比较深入的研究[15-17]发现细胞因子在骨形成和骨吸收方面发挥不同的作用。有人[18]对单个影响骨吸收的细胞因子作了报道，发现中药确能影响细胞因子，但方法落后，所测指标较少，所得结果有所偏颇。 综上所述，尽管人们已发现ER、VDR、CK、C-fos转录因子，I型胶原、细胞因