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独创Il生声明
本人∥I¨J所小交的沦义.II!=我个人杓:诤jlllij+Ie l士卜诅行的研究Lfl二及嫩酣的剧『究成 粜·,S我所知.除了义·}I¨心U JJll以毒u;rl:和敏阱f向地力’外.沦丈·l-小包含其他人L三缝发 农或Jj}ll’’弓过的研究成粜.也小也龠为铁得IIj幽农、№科。≯院或儿它辙仃机构的学化或证 l 5I『Ij他JIj过的利率1。勺找’¨l:们;ri’j川忠刈+本饼究所做的代们di献均L三n:.沧文巾作-, 明确I.I勺说明井投小了测怠.
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中国农业科学院论文题冈
中国农业科学院
论文题冈 绿宙熔刺吸胁迫诱导棉花SSH文埠的构逃与分析
沦文作者 李静 专业 生物安全 研究方向 转基引棉花环境安
全
指导教师 挺金杰 培养单位(研究所) 中园农业科学院棉花研究所
姓名 职称 颂(博) 单 位 ‘号 业
导师 签名
评 颂导∥
王器林 研究员 僻导口 全圜农、Jk技术i|;IE广nll务巾,心 生物交全 ‘\.
阅
硕导晒 中圜农业科学院j:j:f物保护研 农业昆虫与害
删研究
究所(南隧) 虫舫治 、\、\
入 划力。学 员 博导口
谷
辩 颂导口
主 房卫平 研究员 博导订 河南省农业科学院 作物遗传育种 柏
席
华盒平 教授 硕导口 中围农业大学农学与,七物技
博导d 术学院 作物j!!f传育种 螗.率
I
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王省芬 教授
胖导口 河北农业大学农学院 作物遗传胃种 编芬
答 硕譬回
杨伟华 研究员 农产品质皿与
僻咎口 中国农业科学院棉花研究所 彤孵
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叶武威 研究员
懈导口 中囡农北科学院{帘仡研究所 作物迎传商利·
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委
邢朝柱 研究员
博导口 中困农业科学院棉花研究所 作物遮1:々育种
员
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朱醐立 砌I究员 I雌锑口 中圜农qp科学院棉花研究所 作物遗体育种 磊髫
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摘
摘 要
针对Bt棉大面积种植后,棉盲蝽对棉花的为害日益严重、防治困难等现状,本文以转双价 基因(Bt+CpTl)抗虫棉中棉所4l和常规棉中棉所23为试验材料,应用分子生物学、生物信息 学、荧光定量分析等技术方法,构建了绿盲蝽(Apolygus lucorum Meyer-Dttr)刺吸胁迫诱导棉花 SSH文库,对差异基因进行了半定量和荧光定量分析,明确了棉花在刺吸胁迫和非刺吸胁迫处理 条件下应激基因的表达差异,且比较了抗虫棉和常规棉SSH文库ESTs的差异,本文对于深入研 究棉花抗绿盲蝽机制,发掘和克隆棉花诱导防御基因,培育抗棉盲蝽的棉花品种,探求防治绿盲 蝽新方法具有重要意义。本研究取得以下重要结果:
l、构建了绿盲蝽刺吸胁迫常规棉(中棉所23)和抗虫棉(中棉所41)的抑制性消减杂交文 库。常规棉SSH文库共获得92个有效unigene,其中正向文库中75个,反向文库中17个;抗虫 棉SSH文库共获得96个有效unigene,其中正向文库中78个,反向文库中18个。
2、比对了常规棉和抗虫棉Unique EST序列的相似性,常规棉SSH文库中EsTs未找到与其
相似序列有60个,找到其相似序列的有32个;抗虫棉SSH文库中ESTs未找到与其相似序列有 23个,找到相似序列的有73个。经对常规棉和抗虫棉SSH文库中所得差异基因进行分析,明确 了绿盲蝽胁迫棉花的应激过程涉及到抗逆防御反应、能量合成代谢、信号传导与基因调控等多个 生物途径,诱导表达的基因直接或间接地对绿盲蝽刺吸胁迫产生防御作用。
3、利用半定量的方法分析了常规棉和抗虫棉正反向文库ESTs,筛选出8条差异显著的基因,
5条为上调表达,3条为下调表达。利用荧光定量技术分析了绿盲蝽刺吸胁迫和人为机械损伤条 件下PPO(多酚氧化酶)、LRR.RLK(富亮氨酸类受体蛋白激
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