黄芪多糖对内毒素诱导的U937细胞分泌炎症因子的影响及其机制的研究-化学工程与技术专业毕业论文.docxVIP

摘要黄芪多糖对内毒素诱导的U937细胞分泌炎症因子的影响及 摘要 黄芪多糖对内毒素诱导的U937细胞分泌炎症因子的影响及 其机制的研究 摘要 黄芪多糖(Astragalus Polydsacch撕de，APS)是黄芪中最有效，含量 最高的成分之一，具有增强免疫器官功能，促进抗体的产生，提高巨 噬细胞活性，加强T、B淋巴细胞和NK细胞等免疫细胞的功能等作用。 内毒素的主要成分脂多糖(1ipopolysacch撕de，LPS)是革兰阴性细 菌外膜的一种大分子结构成分，可通过诱导体内单核巨噬细胞合成并 释放多种炎症介质，如肿瘤坏死因子(TNF)一0【、白细胞介素(IL)-1p及 一氧化氮(NO)等，而导致许多病理生理反应。抑制巨噬细胞所产生的 炎症介质已经成为抗炎药物研究和治疗的靶点。用LPS诱导单核巨噬 细胞U937细胞(经PMA诱导分化成熟)，建立内毒素诱导的细胞模型， 研究黄芪多糖对该细胞模型分泌的炎症因子的影响及相关机制，为黄 芪多糖对内毒素引起的炎症反应的治疗提供进一步的实验依据。主要 工作如下： 1．培养人单核巨噬细胞系U937细胞，体外PMA诱导其成熟。通过细 胞毒实验筛选黄芪多糖用药浓度。结果显示，37．5～150肛g／ml浓度范 围内的黄芪多糖对经PMA诱导的U937细胞存活率无明显影响。 北京化工人学硕，上学位论文2．LPS诱导U937巨噬细胞，建立炎症模型，加入不同浓度的黄芪多 北京化工人学硕，上学位论文 2．LPS诱导U937巨噬细胞，建立炎症模型，加入不同浓度的黄芪多 糖作用48h，采用酶联免疫吸附试验(EUSA)测定LPS诱导的U937细胞 各组细胞上清液中炎性因子TNF．眠IL．1p的含量；采用Griess试剂检 测组细胞上清液中NO的含量；采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测 各组细胞TNF．0【、IL．1p及iNOS mRNA的表达。结果显示，LPS作用 于PMA诱导的U937细胞后，细胞上清液中TNF．叭IL．1p及NO的含量 明显增加(尸O．01)。37．5～150p∥ml的黄芪多糖干预后，含量明显下 降，与LPS组比较有显著性差异俨O．05)。LPS刺激后，TNF—a、IL—lp 及iNOS mRNA的表达显著升高俨O．01)。37．5～150“∥ml的黄芪多糖 干预后，TNF．叭IL．1D及iNOS mRNA的表达与LPS组相比显著降低， 差异有统计学意义俨O．05)。 3．利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(westem blot)检测各组细胞细胞核 内NF．KB的含量。结果显示，U937细胞经LPS{!乍朋后，细胞内NF．KB P65表达水平增高。黄芪多糖作用后，NF．KB P65表达水平与LPS组相 比显著降低。 除了巨噬细胞外，淋巴细胞及树突状细胞也是机体重要的免疫细 胞。淋巴细胞产生于机体的中枢淋巴器官和周围淋巴器官，分布于外 周血、脾脏、全身各处淋巴结及PP结等处，在全身免疫系统及黏膜免 疫系统内免疫诱导部位及免疫效应部位之间不断的迁移，同时伴随着 淋巴细胞本身的分化成熟，参与机体的免疫应答。树突状细胞(DCs) 作为机体功能最强的抗原提呈细胞(antigen presenting cells，APCs)，它 能快速有效地摄取、加工处理和递呈抗原，处于启动、调控、并 响可间接反映其免疫调节作用。本论文基于此进行以下实验： 响可间接反映其免疫调节作用。本论文基于此进行以下实验： 1．取小鼠原代外周血单个核细胞、腋下淋巴结细胞、脾脏淋巴细 胞及PP结淋巴细胞，采用MTT法检测不同浓度的黄芪多糖对ConA 诱导的细胞活力的影响。结果显示，37．5～300肛∥ml浓度范围内的 黄芪多糖能够促进ConA诱导的外周血单个核细胞、腋下淋巴结细 胞、脾脏淋巴细胞及PP结淋巴细胞增殖∽O．05)。 2．取小鼠原代骨髓来源单个核细胞，体外mGM．CSF和IL．4诱导6 天后，加入浓度为150pg／ml的黄芪多糖进行干预。结果显示，经过 黄芪多糖的作用，细胞形态上呈典型的树突状细胞形态。细胞表 面标记分子I．～I．E、CD80、CD86的表达与对照组相比显著升高(尸 O．01)。 关键词：黄芪多糖，巨噬细胞，TNF—Q，IL一1 B，N0，淋巴细胞，树 突状细胞 llI 北京化工大学创.1:学位论文 W ABSTRACTAstragalus ABSTRACT Astragalus Polydsaccharide(APS)is one of the most efl’ectiVe and important ingredient isolated ljrom the roots of Astragalus membranaceus， which signi矽cantly enhances i