植物赤霉素GA酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书.pdf

植物赤霉素(GA)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号：E0759Pl 本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! 预期应用 ELISA 法定量测定植物植物组织、细胞或其它相关样本中赤霉素含量。 实验原理 用纯化的赤霉素抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生 物素化的赤霉素抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB 在过氧化 物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的赤霉 素呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ 值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1、 酶标板：一块（96 孔） 2、 标准品（冻干品）： 2 瓶，请临用前 15 分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至 1ml，盖 好后室温静置大约 10 分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为 40 ng/ml，将其稀 释为 10 ng/ml 后，再做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制 成 10 ng/ml，5 ng/ml，2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，0.156 ng/ml， 样品稀释液直接作为空白孔 0 ng/ml。如配制 5 ng/ml 标准品：取 0.5ml （不要少于 0.5ml ）10 ng/ml 的上述标准品加入含有 0.5ml 样品稀释液的 Eppendorf 管中，混匀即 可，其余浓度以此类推。 3、 样品稀释液：1×20ml。 4、 检测稀释液 A：1×10ml。 5、 检测稀释液 B：1×10ml。 6、 检测溶液 A：1×120 /瓶（1:100）。临用前以检测稀释液 A 1:100 稀释（如：10 检 测溶液 A / 990 检测稀释液 A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总 量配制（100 /孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。 7、 检测溶液 B：1×120 /瓶（1:100）。临用前以检测稀释液 B 1:100 稀释。稀释方法同检 测溶液 A。 8、 底物溶液：1×10ml/瓶。 9、 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。 10、终止液：1×10ml/瓶（2 mol/L H SO ）。 2 4 11、覆膜：5 张 12、使用说明书：1 份 自备物品 1、 酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、 微量加液器及吸头，EP 管 3、 蒸馏水或去离子水，滤纸 植物标本的采集及保存 1、 新鲜植物组织请在液氮中充分研磨； 2、 加入样品体积 3 倍的提取液（10% TCA), 置于-20 过夜； 3、 请于 4 ，8000rpm，离心 1 小时，弃上清，收集沉淀； 4、 沉淀加入等体积的冰浴丙酮，混匀后于 4 离心（8000rpm，15 分钟），弃上清并真空干燥， 保存备用； 5、 上样前加入裂解液（2.7g 尿素，0.2g C