植物角质降解菌的种属鉴定发酵条件优化及酶学性质.pdf

动物营养学报２０１６，２８（１１）：３５６７⁃３５７５ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１６．１１．０２５ 植物角质降解菌的种属鉴定、发酵条件 优化及酶学性质研究 １ １∗ １ ２ 梁争文 　 张铁鹰 　 李　 爽 　 刘俊丽 （１．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京 １００１９３； ２．甘肃农业大学动物科学技术学院，兰州 ７３００７０） 摘　 要： 本试验旨在通过角质降解菌株Ｘ８Ｐ 的种属鉴定、发酵条件优化和酶学性质研究，探讨 降解植物表面角质层，进一步改善动物对植物纤维利用的可能新方案。 试验通过形态观察和 １６ＳｒＤＮＡ 测序鉴定菌株Ｘ８Ｐ种属，并对其产酶所需碳源、氮源、发酵温度与时间进行优化，其发 酵液经硫酸铵盐析沉淀获得其胞外蛋白粗酶，并对其粗酶催化的适宜ｐＨ和ｐＨ稳定性、温度和 温度稳定性，以及有机溶剂、表面活性剂和金属离子对其活性的影响进行研究。 结果表明：１）菌 株Ｘ８Ｐ 经形态观察和分子鉴定为东方醋杆菌（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）。 ２）菌株Ｘ８Ｐ适宜产酶发 酵条件为溶菌肉汤（ＬＢ）培养基中３７ ℃发酵４ ｄ，１％橄榄油和 １％葡萄糖明显促进菌株产酶，而 １％可溶性淀粉明显抑制菌株产酶。 ３）该菌株胞外粗酶催化适宜ｐＨ和温度分别为６．５和４５ ℃， 且表现出一定ｐＨ稳定性，但在有机溶剂中不稳定，仅甘油中可保留全部活性，在二甲基亚砜 （５０％）中活性可保留６６％。 吐温（Ｔｗｅｅｎ）⁃２０（１ｍｍｏｌ／ Ｌ）、Ｔｗｅｅｎ⁃８０（１ｍｍｏｌ／ Ｌ）和聚乙二醇辛 ＋ 基苯基醚（１和 １０ ｍｍｏｌ／ Ｌ）可使菌株Ｘ８Ｐ粗酶活性提高３％～３５％。 金属离子钾离子（Ｋ ）、锰 ２＋ 离子（Ｍｎ ）（１和 １０ ｍｍｏｌ／ Ｌ）可使菌株Ｘ８Ｐ粗酶活性提高２％～２０％。 由此可见，菌株Ｘ８Ｐ具 有一定的产角质酶潜力和应用前景，可进一步深入研究。 关键词： 角质；角质酶；角质降解菌；发酵条件优化；酶学性质 中图分类号：Ｓ８１１．６　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１６）１１⁃３５６７⁃０９ 　 　 植物叶片和籽实表面均覆盖有角质层，厚度 解的主要障碍之一。 破坏植物角质层，会使其渗 － ［１ ２］ ［５］ 约为０．１ μｍ 。 角质层主要组成成分为角质， 透性增加，机械强度降低 。 此外还含有约０．６％蜡质、０．９％果胶、１．３％蛋白质、 　 　 角质降解菌产生的角质酶可水解角质层屏 ［３］ ２．０％非纤维多糖、灰尘及杂质等组分 。 角质层 障，利于其侵染植物。 经角质酶处理的植物性饲 化学性质稳定，且耐酸碱、耐氧化，这可能使反刍 料亦同样利于动物消化道内微生物及酶快速与植 动物瘤胃中和猪、兔等单胃动物后肠微中生物及 物内部组织结合，增加表面微生物及酶的活性，提 其酶与饲料原料纤维的有效接触减少，也可能使 高纤维降解速率。 因此，采用生物技术手段破坏 黏附在植物纤维颗粒上的微生物数量减少，从而 植物角质层可能是提高饲料植物纤维消化利用的