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护理无菌操作实验报告 　　无菌操作基本技术　　1.在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放于操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒，以避免往返拿取造成污染机率增大。　　超净工作台台面每次实验前用75％酒精擦拭，按照顶板→侧壁→器械→挡风玻璃→操作台面的顺序对超净台内部进行彻底的消毒。然后开启超净台和无菌培养室的紫外灯照射30min，关闭紫外，启动风机运转15分钟后，方可开始实验操作。在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线。　　2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流流通。实验用品以75%酒精擦拭后放入无菌操作台内。实验操作应在台面中央的无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。　　3.小心取用无菌实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖端或容器瓶口，亦不要在开口容器的正上方操作。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用。　　4.操作人员应注意自身安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台。操作过程中，应避免引起气溶胶的产生，小心毒性药品，例如DMSO，并避免尖锐针头的伤害等。　　5.每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同也不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口。　　6.实验完毕后，关闭超净台风机，以75%酒精擦拭操作台面及其他实验物品，将多余的物品拿出超净台，打开风机运转15min，关闭风机并打开紫外灯照射30min。　　7.定期检测CO2钢瓶的CO2压力；CO2培养箱的CO2浓度、温度、水盘是否有污染(水盘的水为无菌水，每周更换)；定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000小时/HEPA)。　　预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到最小程度。　　一般预防可从以下几方面着手：　　1、添加抗生素　　2、从物品、用品消毒灭菌着手　　细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。　　操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。　　3、从操作者做起　　进无菌室前要用肥皂洗手，按规定穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。　　操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。　　操作时要常更换吸管，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。　　4、防止细胞交叉污染　　在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分。吸取营养液、PBS、细胞悬液　　及其它各种用液时，均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或导致细胞交叉污染。　　在进行换液或传代操作时，手或注射器、滴管等不能经过开口瓶口上方，不能触及瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。加液时如吸管尖碰到瓶口，则应将吸管丢掉。　　细胞一旦购置或从别处引入，均应及早留种冻存，一旦发生污染可重新复苏培养。　　5、无菌室的彻底消毒　　甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气休对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。　　容器破碎及感染性物质的溢出的处理：　　1小玻璃瓶及其他容器等被传染性物质污染的破碎物品，以及培养物等溅洒的传染性物质，应当立即佩戴手套用布或纸巾覆盖。　　2在上面倒上消毒剂，并使其作用适当时间。　　3清理破碎物品及污染物，再用消毒剂擦拭污染区域。　　4用于清理的布等应当放在盛放污染性废弃物的容器内。　　5如果实验表格或其他材料被污染，在妥善转抄或拷贝后，应当将其弃入污染废弃物容器。　　授课班级：XX级临床本科2班　　授课时间：第二周星期四1、2节2学时　　授课章节：第三章医院内感染的预防与控制　　重点：无菌技术操作　　难点：无菌技术操作　　教学方法：实习示教练习　　学时分配：　　一、评估2min　　二、计划3min　　三、示教10min　　四、评估3min　　五、注意事项2min　　六、学生回示4min　　七、教师指导6min　　八、分组练习60min　　教学内容：　　实践课无菌技术　　一、评估　　1、评