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黄芩苷对热应激条件下小鼠胚胎HSP70及凋亡相关因子表达的影响-临床兽医学专业毕业论文.docx

黄芩苷对热应激条件下小鼠胚胎HSP70及凋亡相关因子表达的影响-临床兽医学专业毕业论文.docx

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万方数据 万方数据 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰 写过的研究成果,也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过 的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并 表示了谢意。 研究生签名: 时间: 年 月 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送 交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手 段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学 位论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名: 时间: 年 月 日 导 师 签 名 : 时间: 年 月 日 青岛农业大学硕士学位论文 青岛农业大学硕士学位论文 摘要 黄芩苷对热应激条件下小鼠胚胎 HSP70 及凋亡相关因子表 达的影响 摘 要 在受热及其他不利理化因素的刺激下,多数生物细胞会产生热休克蛋白(HSPs), 其中 HSP70 在生物细胞中含量最高,可诱导性最强,对细胞具有显著抗热作用。细胞 凋亡是由基因控制的细胞自主的程序性死亡,其中线粒体在细胞凋亡中起着无法替代的 作用。Bcl-2 家族对线粒体凋亡通路具有显著的调控作用,其中 Bcl-2 具有抗凋亡作用, 而 Bax 能够拮抗 Bcl-2,起到促凋亡的作用。Caspase 被认为是一切凋亡信号转导的共同 通路,在 Caspase 家族中,Caspase-3 是最重要的凋亡执行者。黄芩苷是从黄芩的干燥 根中提取的主要成分之一,其解热作用显著。目前有关黄芩苷在胚胎上的的抗热作用机 制研究甚少,而黄芩苷诱导 HSP70 表达拮抗热应激条件下的胚胎凋亡可能是黄芩苷抗 热应激的机制之一。本研究将检测不同浓度的黄芩苷对体外胚胎发育的影响和对热应激 诱导的小鼠胚胎 HSP70、Bcl-2、Bax 和 Caspase-3 表达的影响,以探索黄芩苷保护热损 伤胚胎的部分机理。试验方法及结果如下: 在 CZB 胚胎培养液中添加终浓度分别为 2 μg/mL、4 μg/mL 和 8 μg/mL 的黄芩苷, 将体外获取的原核期胚胎放入培养液中培养,记录胚胎各阶段发育率及囊胚期细胞总 数。随后对发育至囊胚的胚胎进行 41℃ 1 h 的热应激处理,试验分为 37℃和 41℃对照 组及 41℃黄芩苷组(2 μg/mL、4 μg/mL 和 8 μg/mL),恢复 3 h,提取总 RNA 用巢式-PCR 检测 HSP70、Bcl-2、Bax 和 Caspase-3 mRNA 相对表达量;用免疫荧光法检测 HSP70、 Bcl-2、Bax 和 Caspase-3 蛋白的分布及相对表达量。 试验结果显示:在 CZB 胚胎培养液中添加 4 μg/mL 黄芩苷时,其各阶段胚胎发育 率及囊胚细胞总数均显著高于对照组(P0.05)。41℃对照组和黄芩苷各组均能显著诱 导小鼠胚胎的 HSP70 蛋白的表达(P0.05),HSP70 mRNA 表达量除 4μg/mL 黄芩苷组 与 41℃对照组差异显著外(P0.05),其余各组与 41℃对照组相比均不显著(P0.05)。 与 41℃对照组相比,黄芩苷组小鼠胚胎中 Bcl-2 mRNA 和蛋白的表达量均显著升高 (P0.05), Bax 和 Caspase-3 mRNA 和蛋白表达量均显著降低(P0.05)。 以上结果说明:在 CZB 胚胎培养液中添加黄芩苷(2~8 μg/mL)能促进体外小鼠胚 胎发育及细胞增殖,最佳浓度为 4 μg/mL。41℃热应激可通过线粒体凋亡通路诱导小鼠 胚胎发生凋亡,并且可提高 HSP70 蛋白的表达。本试验条件下,黄芩苷(2~8 μg/mL) 能够上调热应激诱导的小鼠胚胎 HSP70 和 Bcl-2 表达,下调 Bax 和 Caspase-3 表达,抑 I 制线粒体凋亡通路,对胚胎起到保护作用。 关键词:小鼠胚胎;热应激;黄芩苷;HSP70;凋亡相关因子 II 青岛农业大学硕士学位论文 青岛农业大学硕士学位论文 ABSTRACT Effects of Baicalin on Expressions of HSP70 and Apoptotic Related Factors in Mouse embryos Subjected to Heat Stress ABSTRACT Most of living cells can produce heat shock proteins (HSPs) under the stimulate of adverse heat

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