氧化酶的分布／一.pdf

维普资讯 C J l一 6 氧化酶的分布 ／一 姚雅琴 张改生z ， lD ． (1西北农业 军j 军心．2裹摹幕 西 凌7121001 摘 要 用电镜细胞化学定位技术，对ms(Ae，kotscayi)一77(2)雄性不育花药及其保持 系花药壁四层组织和维管组织细胞中的细胞色素氧化酶进行了定位和相对定量的研究．结 果表明，药壁中层、绒毡层细胞内细胞色素氧化酶的变化，不育系与其保持系基本一致，而药 壁表皮、药室内壁和维管组织细胞内线粒体中的细胞色素氧化酶的含量明显低于其保持系。 推测，细胞色素氧化酶活性降低可能是导致花粉败育的重要因素之一。 关键词 尘至：哇丝丕直，墅堕鱼鲞基 壁跫堂笪拽． 中图分类号 Q：336，$334 近年来，随着分子生物学的发展，限制性 内切酶技术及细胞器DNA分离技术的应 用，人们越来越多地认为mtDNA与雄性不育密切相关 刘炎生口以线粒体细胞色素氧化 酶亚基 I、Ⅱ(coxI、COXⅡ)基因为探针，与不育系及其保持系的叶绿体DNA和线粒体 DNA酶切片段分别进行杂交．发现叶绿体DNA没有该基因的同源顺序，而线粒体DNA 该基因在不育与可育之间存在组织结构的差异。沈银柱 ]，黄铁城 生化分析表明 ·不育 植株细胞色素氧化酶的含量明显低于其保特系。作者在前人研究的基础上，以ms(Ae， kotschyi)一77(2)小麦雄性不育系及其保持系为材料，用电镜细胞化学定位技术，对被普遍 认为与细胞质雄性不育密切相关的线粒体基因COXI、COXI编码部分亚基，并具重要生 理功能的细胞色素氧化酶进行定位和相对活力研究，将生理生化功能与超微结构结合起 来，从细胞色素氧化酶分布及超微结构变化的角度，探讨其功能与雄性不育的关系。 1 材料与方法 材料为K一77(2)A和K一77(2)B花药，采 自西北农业大学小麦研究所杨天章教授试 验地。按文献[4]方法取样后，固定在 0．5 戊二醛与2 多聚甲醛混合固定液中20rain， 0．1mol／LPBS(磷酸缓冲液)漂洗，在含有0．1g／L过氧化氢酶的PBS预浮液中37E：下 预浮育 10rain，PBS漂洗，再放人包含3，3-二氨基联苯胺(简称DAB)0．1g／L，过氧化 氢酶1g／L，细胞色素C1g／L．PBS0．1mol／L的浮育介质 中3TC下浮育1h．同时，将 另一部分花药浸入含有0．1mmol／LKCN的浮育介质中，在相同条件下，浮育相同的时 同作为对照。然后将所有样品在PBS中过夜，按照常规进行后固定、脱水、渗透、包埋和切 片，10qcx一Ⅱ透射 电子显微镜下观察拍照 收稿 日期 1997—03—10 课题来源 跌西省 自然科学基盘资助项 目 作者简介 姚雅琴，女．]957年生，高级实验师，顾士 维普资讯 2 西北农业大学学报 第 25卷 2 结果与分析 DAB与线粒体膜上的细胞色素氧化酶反应，被氧化聚合形成不溶性吩啸聚合体沉积 在线粒体蝽膜上，该聚合体又与四氧化饿作用形成嗜饿性DAB氧化聚合物，电镜下通过 观察嗜饿性DAB氧化聚合物的分布来确定细胞色素氧化酶的位置，KCN能够抑制这一 过程的进行。本实验用畲有0．1mmol／LKCN的DAB浮育液处理的对照花药中，没有发 现嗜锇性DAB氧化聚合物的存在(图版 I-1)，而用未加KCN的DAB浮育液处理的同 样花药中却发现有程度不同的嗜锇性DAB氧化聚合物分布，且雄性不育花药与其保持 系花药中不同，同一花药不同的发育时期也不同，该嗜锇性DAB氧化聚合物均分布在线 粒体内嵴膜上(图版 I-2)。 2．1 保持系花药药壁组织内蜘胞色素氧化酶的分布 本实验观察了药壁四层组织(药壁表皮、药室内壁、中层、绒毡层)和花药维管组织细 胞内细胞色素氧化酶活性分布。在小孢子母细胞和四分体时期，绒毡层、