微生物法生产丙烯酰胺的研究.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( ) ! *’ )# 年 月 #$$# % !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,-./ #$$# !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 微生物法生产丙烯酰胺的研究（ ） ! ———腈水合酶催化反应动力学与失活动力学 陈 跖 孙旭东 史 悦 沈忠耀 （清华大学化工系生物化工研究所，北京 !$$$1 ） 赵建勋 孙小颖 （山东胜利石油管理局，东营 #65$!E ） 摘 要 在以丙烯腈为原料，微生物转化生产丙烯酰胺的过程中，酶催化反应是过程的关键。为了了解酶催化的 动力学，本研究以自由细胞的酶为催化剂，进行了腈水合酶的反应动力学和失活动力学的研究。首先研究了菌体 浓度、温度、 值、丙烯腈浓度、丙烯酰胺浓度等对腈水合酶催化反应速度的影响。结果表明，在这些因素中，温度 FG 和丙烯酰胺浓度是最主要的影响因素。#H 时酶活为 646EDI:J （菌液），在 6H 时的反应速率仅为 #H 时的 ，相应的表观酶活为 （菌液）。而在丙烯酰胺 浓度条件下的酶活大约只有丙烯酰胺 浓度下 !!K5# L 44%DI:J 16 L 6 L 的酶活的 O ! 。经过对不同温度下的反应速度的研究，得到腈水合酶水合反应的活化能为 · 。本文进 !I# 46 K65MN :’( 一步研究了自由细胞状态下，菌体浓度、 值、温度、丙烯腈浓度、丙烯酰胺浓度对腈水合酶失活的影响，得到了失 FG 活动力学。结果表明，在这些因素中，对酶失活影响的最主要因素还是温度和丙烯酰胺浓度。尤其当丙烯酰胺浓 度到达 时，酶活下降得很快，在 后，酶活几乎为零。而在丙烯酰胺浓度为 的情况下， 的酶活仍然 %6 L 66 / !$ L 66 / 还存在约6$ L 。试验结果还表明，丙烯腈对酶的稳定性的影响很小。经过数据处理，得到的#H 的酶失活速率常 数为 O ! 下的 倍。经过对温度与失活速率常数的拟合，得到腈水合酶失活反应的活化能为 · 。 6H #!K55 E# K#MN :’( 关键词 丙烯酰胺，丙烯腈，腈水合酶，酶催化反