测定未知蛋白分子量.PPT

* * V。，Vi和未知蛋白的测定 V。大约在9管左右 Vi大约在23管左右 未知蛋白大约在16管左右 五.V。和Vi的测算 层析用凝胶柱在使用前一般都应了解其V。和Vi的大小。对分析用柱尤其是这样。稳定的凝胶拄床，V。通常占柱床总体积Vt的30％左右。V。太大则说明柱床没有达到稳定。对于相同型号凝胶所装的凝胶柱来说，粗颗粒者的V。往往比细粒者为大。 1．V。及Vi的测算 （1） 重量法 已知： Vt＝V0十Vi十Vg＝π/4·d2h Vi=g·Wr 式中g为干胶重量，Wr为“得水率”，即每克干胶之吸液量。 所以 ： V。=Vt－（Vi十Vg） 但这种算法不够准确，主要原因是Vg难以计算，它和凝胶的水化程度有关。一般粗略地将其估算为1cm3／g干胶。 （2） 过柱法 已知物质的洗脱体积 Ve＝Vo十KdVi 如用全渗入（Kd＝1）或全排阻（Kd＝0）的物质过柱，测量其洗脱体积，便可计算出该凝胶柱的V。值及Vi值。实验室中最常用的是蓝色葡聚糖（Kd＝0）及重铬酸钾（Kd＝1），硫酸铵（Kd＝l）等。 2．Kd及Kav的测算 当测得某物质的Ve,并不知道该凝胶柱的