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第七章 吸光光度法 第一节 概述 一、光 二、 吸光光度法定义 当用光照射溶液时，溶液对光产生吸收作用，且此吸收作用与溶液的浓度有关。 对于有色溶液，其吸光作用与颜色深浅有关，利用眼睛观察比较溶液颜色深浅来测定物质浓度的方法称为目视比色法； 使用分光光度计来进行的比色法称为分光光度法； 目视比色法和分光光度法统称为吸光光度法。 三、吸光光度法的特点 四、本章学习要点 理解吸光光度法的基本原理、基本术语，理解吸光光度法定性与定量分析的原理。 掌握显色反应和显色条件的选择 掌握测定条件的选择和优化方法。 掌握目视比色法的原理和方法，熟悉常见紫外-可见分光光度计的结构、种类、使用及维护方法。 吸光光度法的应用 第二节 吸光光度法的基本原理 一、物质的颜色及对光的选择性吸收 二、溶液吸收曲线与浓度的关系 物质对光选择性吸收的特性，通常用吸收曲线来进行描述。将不同波长的单色光透过某一固定浓度和厚度的某物质的溶液，测量每一波长下溶液对光的吸光度（A），然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，所得曲线即为该物质的吸收曲线（也称为吸收光谱），它描述了溶液对不同波长光的选择性吸收程度。图为1,10-邻二氮杂菲亚铁溶液的吸收曲线。 在物质对光的吸收曲线上，吸光度最大处所对应的波长称为该物质的最大吸收波长（用λ max 表示） 不同物质的吸收曲线的形状和最大吸收波长不同，说明光的吸收与溶液中物质的结构有关，根据这一特性可用作物质的初步定性分析。 不同浓度的同一物质，吸收曲线的形状相似，最大吸收波长相同，但吸光度值却不同。在任一波长处，溶液的吸光度随浓度的增加而增大，稀溶液对光的吸收符合朗伯-比耳定律，即稀溶液的吸光度与浓度成正比关系，这是分光光度法定量分析的依据。 在最大吸收波长附近吸光度的变化最为明显，所以定量分析中常选择最大吸收波长来测定吸光度，以获得较高的灵敏度。 三、光吸收的基本定律-朗伯-比耳定律 吸光分光光度法定性分析的依据是不同物质对光吸收的选择性不同，而定量分析的依据则是光吸收定律。 当一束平行单色光 (I0 ) 照射到均匀而透明的厚度为 b 的、浓度为 c 的溶液上时，一部分在介质的表面上反射，一部分为介质所吸收，只有一部分可透过介质，故透过光的强度(I ) 减弱。透射光强度与入射光强度的比值称为透光度或透光率（旧称透射比，用符号 ? 表示），用T 表示.物质对光的吸收程度常用吸光度A（旧称光密度）表示 。 朗伯-比耳定律描述了物质与光的这种相互作用的定量关系。 四、偏离朗伯-比耳定律的原因 1．非单色光引起偏离 2．比尔定律的局限性引起偏离 3．化学因素引起偏离 4. 其它因素 小 结 物质对光的选择性吸收 吸收曲线与定性分析 朗伯-比耳定律与定量分析 偏离朗伯-比耳定律的因素 第三节 显色反应及显色条件的选择 一、对显色反应的要求 ① 选择性好。显色剂最好只与一种被测组分起显色反应，或显色剂与共存组分生成的化合物的吸收峰与被测组分的吸收峰相距比较远，干扰少。 ② 灵敏度高。灵敏度是分析过程主要考虑的因素之一，微量分析的情况下要有较高的灵敏度。反应生成的有色化合物的摩尔吸光系数越大，灵敏度越高。 ③ 生成的有色化合物组成恒定，化学性质稳定，测量过程中应保持吸光度基本不变，否则将影响吸光度测定的准确度及再现性。 ④ 有色化合物的颜色与显色剂的颜色差别要大。有色化合物的吸收峰应与显色剂的吸收峰有较大的差别，这样，显色前后颜色变化明显，试剂空白值一般较小。 ⑤ 显色条件要易于控制，以保证其有较好再现性。 二、显色条件的选择 1. 显色剂的用量 2. 溶液酸度 3. 显色温度 不同的显色反应对温度的要求不同。大多数显色反应是在常温下进行的，但有些反应必须在较高温度下才能进行或进行得比较快。例如 Fe3+ 和邻二氮菲的显色反应常温下就可完成，而硅钼蓝法测微量硅时，应先加热，使之生成硅钼黄，然后将硅钼黄还原为硅钼蓝，再用分光光度法测定。也有的有色物质加热时容易分解，例如 Fe(SCN)3-，加热时褪色很快。因此对不同的反应，应通过实验找出各自适宜的显色温度范围。由于温度对光的吸收及颜色的深浅都有影响，因此在绘制工作曲线和进行样品测定时应该使溶液温度保持一致。 4. 显色时间 时间对显色反应的影响需从以下两方面综合考虑。一方面要保证足够的时间使显色反应进行完全，对于反应速率较小的显色反应，显色时间需长一些。另一方面测定必须在有色配合物稳定的时间内完成。对于较不稳定的有色配合物，应在显色反应已完成且吸光度下降之前尽快测定。确定适宜的显色时间同样需通过实验做出显色温度下的吸光度－时间关系曲线，在该曲线的吸光度较大且恒定的平坦区域所对应的时间范围内完成测定是最适宜的。 5.