密码子优化.PDFVIP

活性蛋 白整体 方案 ActiveProteinSolutions 基因优化实验案例 1. 案例概述2 2. 实验设计2 3. 密码子使用偏性的优化2 4. GC含量的优化 3 5. mRNA 二级结构的优化4 6. 核糖体结合位点的优化5 7. 表达检测结果5 8. 蛋白纯化与二聚体检测6 9. 服务网址6 Tel (025) 5889- 4959 Sales@DetaiB 活性蛋 白整体 方案 ActiveProteinSolutions 1. 案例概述 基因转录翻译是一个复杂的过程 ，每一步都关系到蛋白质的最终表达 ，其中密码子使用频率、mRNA 二级结 构和 GC含量等都对蛋白表达有着重要影响 ，因此需要对其进行优化。德泰生物综合考虑蛋白质表达过程中的影响 TM 因素 ，自主研发了 MaxCodon 软件 ，可以优化这些关键因素 ，从根本上提高蛋白表达的效率。 某客户在表达一个二聚体蛋白时 ，遇到了蛋白表达量低、无法检测到二聚体等问题。公司接手后 ，用自主研发 的密码子优化软件对基因序列进行优化 ，显著提高了蛋白表达的效率 ，成功纯化得到了二聚体蛋白。 2. 实验设计 TM 将客户提供的目的基因序列 ，输入德泰自主研发的 MaxCodon 软件中进行优化。用宿主细胞使用频率高的 密码子替换稀有密码子 ，提高目的基因在宿主细胞中的 CAI （密码子适应指数 ），预测基因序列的 mRNA 二级结 TM 构 ，减少复杂二级结构的数量 ，并调节将序列的 GC含量调整到合适的水平。MaxCodon 软件还可以通过优化算 法 ，减少核糖体起始位点的类似序列 ，有效避免翻译起始的紊乱。 完成基因优化后 ，在序列 C端添加 His标签 ，方便纯化。之后合成基因 ，插入载体 ，转到大肠杆菌中表达。培 养后 ，破碎菌体 ，收集上清 ，电泳检测。然后纯化上清 ，在还原与非还原条件下电泳 ，检测二聚体是否存在。 3. 密码子使用偏性的优化 不同物种的同义密码子使用频率是不同的 ，这种密码子使用偏性与 tRNA 的丰度有关。 由于 tRNA 是 mRNA 翻译成蛋白质的执行者 ，tRNA 的丰度与蛋白质表达的效率直接相关。因此德泰生物在优化密码子时将目的基因中 的稀有密码子替换成宿主细胞常用的密码子 ，在蛋白质序列不变的情况下 ，提高密码子适应指数 （CAI ），从而提 高目的基因表达水平。 Tel (025) 5889- 4959 Sales@DetaiB 活性蛋 白整体 方案