米非司酮通过上调Smac促进凋亡逆转卵巢癌耐药的实验研究-临床医学;妇产科学专业毕业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的： 通过体外实验观察米非司酮对卵巢癌耐药细胞系SKOV3／DDP耐药性的影 响，并对可能存在的相关机制进行探讨。 方法： 1．采用MTT法检测米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3及耐药细胞系 SKOV3／DDP的细胞毒性作用，通过绘制量一效曲线筛选出细胞抑制率5％时的 非细胞毒性剂量，并将该剂量作为本实验的逆转剂量。同法，测定逆转剂量的 米非司酮与DDP联合作用予SKOV3／DDP细胞后，细胞顺铂耐药性的变化。 2．通过流式细胞仪(FCM)检测逆转剂量的米非司酮作用于SKOV3／DDP 细胞前后不同时间点细胞周期的变化情况。 3．采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印记技术(Western Blot) 检测Smac在SKOV3及SKOV3／DDP两种细胞系中mRNA及蛋白水平表达的差 异，并进一步检测逆转剂量的米非司酮作用于SKOV3／DDP细胞后Smac mRNA 及蛋白水平的表达变化。 结果： 1．MTT的结果显示：米非司酮对SKOV3及SKOV3／DDP细胞均有抑制作 用，并呈现剂量依赖性。当米非司酮的浓度5 rtM时，其对SKOV3及 SKOV3／DDP两种细胞系均无明显的抑制作用(细胞的抑制率均5％)，且经方 差分析，5 gM时细胞的抑制率与低浓度组的抑制率有显著性差异，故将5 IxM 作为本实验的逆转剂量。将逆转剂量的米非司酮与DDP联合作用于SKOV3／DDP 细胞后，细胞对顺铂的耐药性得以逆转，于24、48、72 h测得的逆转倍数分别 为1．36、1．9l、2．48倍。 2．FCM检测结果显示：5 o,M的米非司酮分别作用于SKOV3／DDP细胞24、 48、72 h后，随着作用时间的延长，细胞周期中G0／G1期所占的比例逐渐增加 (48．7％、53．9％、55．1％、59．O％)，而S期所占的比例则逐渐减小(13．5％、9．6％、 7．7％、5．8％)，细胞受阻于GO／G1期。 3．RT-PCR结果显示：SKOV3与SKOV3／DDP细胞系Smac mRNA表达量 的相对值(Smac mRNA／p．actin mRNA)具有显著性差异(1．004-0．05 VS 0．454-0．04， P0．01)，将5“M米非司酮作用于SKOV3／DDP细胞24、48、72h后Smac mRNA 天津医科大学硕士学位论文表达量的相对值随着作用时间的延长而逐渐增加，分别为0．560．03、0．65士0．06、 天津医科大学硕士学位论文 表达量的相对值随着作用时间的延长而逐渐增加，分别为0．560．03、0．65士0．06、 0．73士0．04，各组间差异具有统计学意义(P0．05)，且与作用前相比Smac mRNA 表达量的相对值显著增加，但仍小于SKOV3细胞表达量的相对值(尸0．05)。 4．Western Blot结果显示SKOV3 SmaC蛋白表达量的相对值(Smac／B．actin) 显著高于SKOV3／DDP(0．67士0．03 vs 0．40士0．03，P0．01)。5 uM米非司酮作 用SKOV3／DDP细胞24、48、72 h后SmaC蛋白表达量的相对值随着作用时间的 延长而逐渐增加，分别为0．42士0．01、0．46士0．01、0．560．02，各组间差异具有统 计学意义(P0．05)。24 h较作用前无显著差别(尸0．05)，48 h及72 h时分别 较作用前Smac蛋白的表达量显著增加，但仍小于SKOV3细胞的相对值(尸 0．05)。 结论： 1．米非司酮对SKOV3及SKOV3／DDP细胞生长具有抑制作用，且呈现剂 量依赖性。5 pM的米非司酮对SKOV3／DDP细胞的顺铂耐药性具有一定的逆转 作用，且呈现时间一效应关系。 2．米非司酮逆转SKOV3／DDP细胞顺铂耐药性的可能机制为：米非司酮使 SKOV3／DDP细胞周期阻滞于G0／Gl期，抑制细胞的增殖；通过上调Smac基因 及蛋白水平的表达，促进卵巢癌耐药细胞的凋亡，进而间接逆转耐药。 关键词：卵巢癌米非司酮耐药逆转smac凋亡 II 天津医科大学硕士学位论文Abstract 天津医科大学硕士学位论文 Abstract objective： To observe the effects of miferpritone on drug resistance in ovarian cancer cell lines SKOV3／DDP,and the possible mechanisms were discussed in vitro． Methods： 1．The cytotoxicity of mifepristone on SKOV3／DDP was dete