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沙门氏菌检测方法研究进展 摘要：沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌，能够污染多种食物，引起严重的食品安全问题，因此，建立一种快速而准确的检测方法一直是沙门氏菌检验研究的核心问题。本文对近年来沙门氏菌的检测进展进行了简单的介绍。 关键词：沙门氏菌；检测方法；研究进展 沙门氏菌是革兰氏阴性、细胞内寄生的一种肠道菌。该菌广泛存在于自然界中，不但能引起家畜家禽及其他动物发生急性、慢性或隐性感染，而且还能通过污染食物导致人的食物中毒，对人类造成很大的威胁。在世界各国的各类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常居榜首。在英国，就以沙门氏菌为首位，美国则为第二位。我国内陆地区以沙门氏菌为首位。世界上最大的一起沙门氏菌食物中毒是1953年于瑞典由于猪肉引起的鼠伤寒沙门氏菌中毒，7717人中毒，90人死亡[1]。 沙门氏菌菌型繁多，已确认的沙门氏菌有2500个以上血型。因此，沙门氏菌的检测一直是沙门氏菌研究的核心问题。为了寻求快速、准确、简便、微量的检测技术和方法，国内外学者进行了大量的研究，从以传统方法为基础发展到以免疫学为基础的或以分子生物学为基础的快速检测方法，并在实践中不断取得新进展。下面就对沙门氏菌的检测方法进行简单的介绍。 1 传统标准检测方法 用于检测沙门氏菌的传统方法是将食物样品分步增菌，以增加病原菌的检出率。这种培养方法总体可分为三个不同阶段，预增菌、选择性增菌及分离步骤。传统沙门氏菌检测法全过程需时至少4–7d，才能得出明确的诊断结果。 GB4789.4–94是目前我国规定的对畜产品中沙门氏菌的标准检测方法，主要是根据沙门氏菌的生化特性，进行前增菌、选择性增菌、分离培养、生化鉴定和血清分型五个步骤[2]。在检测畜产品过程中，应注意根据不同的样品采取不同的检测步骤。 2 免疫学方法 免疫学技术是以抗原和抗体的特异性结合反应为基础，再辅以免疫放大技术来鉴别细菌，通过病原体刺激机体产生免疫球蛋白(抗体)的方法。由于免疫法有较高灵敏度，样品经增菌后可在较短的时间内检出，抗原和抗体的结合反应可在很短时间内完成。因此免疫学法在食品微生物检测中应用广泛。 2.1 酶联免疫吸附 1977年，Kryinski与Heimsch首次将酶联免疫吸附测定法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,简称ELISA )用于食品沙门氏菌的检测。相继许多学者都利用ELISA进行食品沙门氏菌的检测，但他们使用的多价抗血清不同程度地存在交叉反应，使ELISA产生假阳性，在实践中有一定困难。上世纪80年代，单克隆抗体技术问世并日趋成熟，建立了抗沙门氏菌各种O抗原、H抗原单抗，取代常规因子血清进行血清学鉴定、伤寒诊断、鸡白痢检疫，并显示出单抗卓越的性能。我国焦新安等应用淋巴细胞杂交瘤技术获得了4株具有沙门氏菌广谱结合特性的单克隆抗体，其中两株的反应互补，对已检菌株覆盖率达99％，而对其它受试肠杆菌均无交叉反应。文其乙等在前人基础上应用沙门氏菌属特异性单克隆抗体CB8 和de7建立了检测沙门氏菌的直接ELISA方法，并形成了快速检测试剂盒，此外，还应用直接ELISA方法对500份蛋品检测，结果表明该方法可靠，且阳性率比国标方法高。黎兆滚等使用ELISA技术，对94份鱼粉样品增菌培养液检测沙门氏菌，结果表明阳性符合率为92％，阴性符合率为100％，总符合率98％以上[3]。 2.2 斑点酶联免疫吸附 斑点酶联免疫吸附(Dot–ELISA)试验是一项免疫学检测技术，具有简单、快速、敏感、特异性强等特点，并具有较高的可重复性。 目前，应用该法检测食品中沙门氏菌的报道很多。张红见等应用Dot–ELISA法对85份猪胴体进行了沙门氏菌的检测。结果表明，在85份肉样中，Dot–ELISA 检出沙门氏菌阳性65份，阳性率为76.47％，检测结果与常规方法一致。雷风应用Dot–ELISA法检测鱼粉85份，对沙门氏菌最低检出量为每毫400个，沙门氏菌阳性检出率75.29％，常规分离培养法阳性检出率为62.35％，两者差异不显著。康明等应用Dot–ELISA检测鱼粉85份，结果表明，64份为阳性，常规分离培养法53份为阳性，两种方法差异不显著。由此可见，该方法简便、特异、快速、结果直观，便于在基层推广使用[4]。 2.3 斑点免疫金渗滤法 斑点免疫金渗滤法(dot–immunogold filtration assay, DIGFA)是20世纪80年代初发展起来的一种以胶体金为标记物的快速免疫结合分析技术，它借助酶联免疫原理，使点在硝酸纤维膜上的样品与胶体金标记的兔抗沙门氏菌抗体结合，若样品中含有沙门氏菌，与胶体金标记的兔抗沙门氏菌抗体结合，形成金标抗原抗体复合物，滞留在硝酸纤维膜上并显色，可得到直观的检测结果，该法具有与酶联免疫吸附试验(ELIS