棉花抗旱衰的转基因研究-作物遗传育种专业毕业论文.docxVIP

y y 6 01 6 8 0 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研 究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要 贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本 人承担。 7 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规 定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质 本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可 以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可 以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名：—奎瞽 导师签名：缎名 目 英文缩略词ABA 英文缩略词 ABA abscisic acid 脱落酸 CAT hydrogen perox i das e 过氧化氢酶 Chl chlorophyl 1 叶绿素 CTAB cetyltrimethylammollonium bromide 十六烷基三乙酸基溴化铵 CTK cytokinin 细胞分裂素 EB ethylenediamino bromide 溴化乙锭． ECM extracel‘’lular cell matrix 胞间基质 EDTA ethylene Diamine Tetraacetic Acid 乙二胺四乙酸 ELISA enzyme l inked immuno sorbent assay 酶联免疫吸附分析 EMS ethyl methane sulfonate 甲基磺酸乙酯 GA gibberelIic acid 赤霉素酸 GUS B—91ucuronidase B一葡糖醛酸酶 IAA indole--3--acetic acid 吲哚乙酸 IPT i sopentenyl transferase 异戊烯基转移酶 Km kanamycin 卡那霉素 佃A malonic aldehyde 丙二醛 NPTⅡ neomyc in phosphotransferase 新霉素磷酸转移酶 PCD programmed c e l t death 编程性细胞死亡 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 POD peroxidase 过氧化物酶 SAGS senescence-assoc iated genes 衰老相关基因 SDS sordium dodecyl sulphate 十二烷基磺酸钠 SOD superoxide di smutase 超氧化物歧化酶 TE Tris·C1。EDTA buffer Tris·Cl和EDTA的缓冲液 Tris T}i shydroxy讯ethyl amion methane 三羟甲基氨基甲烷 X～Gluc 5一bromo一4一chloro一3一indolyl 5一溴一4一氯一3一吲哚 一旦--D--glucuroni de 一B—D一葡糖苷酸 山东农业大学硕士学位论文摘要 山东农业大学硕士学位论文 摘要 本研究以中棉所10号、中棉所24号、中棉所36号为试验材料，利 用花粉管通道技术将该含有嵌合基因Pc呲12--劫芒(辽棉19号中的PSACl2与如芒 基因连接组成)的质粒导入三种棉花品种，采取正交试验设计，探讨基因 型、导入时间、导入DNA浓度和化学诱变剂浓度对棉花转化率的影响，优 化棉花花粉管通道技术的转化体系，提高基因转化效率；采用优化体系， 将该嵌合基因PcsA。；1．,一助芒导入早衰棉中棉所10号，获得转基因抗早衰棉花 植株；通过细胞分裂素酶联免疫吸附测定，证明该外源基因在衰老叶片中 正常表达，衰老叶片中细胞分裂素含量大大提高，从而提高了抗衰老生化 物质的含量和活性，延缓了棉花的早衰。为获得该基因的遗传特性，对 T。代转基因棉株的遗传分离规律进行分析。获得的主要结果如下： l在利用花粉管通道技术进行棉花转基因操作时，不同因素(基因型、 导入时间、导入DNA的浓度和化学诱变剂的浓度)对转化率的重要性依次 为：EMS的浓度棉花的基因型导入DNA的浓度导入时间。受体棉花的 基因型和EMS的浓度对转化率的影响，各处理之间差异达到极显著水平； 而导入DNA的浓度和时间对转化率的影响，各处理之间差异不显著。根据 试验结果确定优选组合：基因型为中棉所24，导入质粒DNA的浓度为O．01 p g／u l，EMS的浓度为0．01 la g／la l，导入时间为棉花受粉后36小时。 2为验证抗早衰基因的功能和优选转化体系的可靠性，选取早衰较重 的中棉所10号作为受体，以棉花自花授粉24小时后(有明显的形态学标 准，便于操作)，导入浓度均为0．01 u g／Il l的DNA和EMS混合液；对照 导入与EMS同体积