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生化实验基本操作的实验报告 　　生物化学实验基本操作　　一、实验目的　　1、熟悉化学类实验室的基本常识、规则、安全及防护知识。　　2、掌握基本实验操作及常用仪器的使用方法。　　3、通过实际操作，进一步掌握理论知识，能独立完成真个实验的设计、操作及计算。　　二、实验仪器与试剂　　1、实验器材　　仪器名称型号厂家　　SartoriusPB-10PH计　　干燥箱101EXB-3型电热鼓风干燥箱上海树立仪器仪表有限公司酶标仪DNM-9602酶标分析仪北京普朗新技术有限公司　　2、实验试剂　　试剂名称生产厂家生产批号质量Na2HPO4XX0701北京化工厂　　NaH2PO4北京益利精细化学品有限公司XX0313　　NaCl天津市塘沽化学试剂厂　　BCA蛋白定量试剂盒北京普利莱基因技术有限公　　三、实验内容　　蛋白质的定量测定　　1、实验原理　　Bicinchoninicacid(BCA)法是近来广为应用的蛋白质测定方法。即在碱性环境下，蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有高的光吸收值，并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。　　2、实验方法　　、工作溶液的配制：　　将50体积BCAReagent与1体积CuReagent混合即为WR工作试剂，呈嫩绿色。　　、标准蛋白溶液配制：　　用双蒸水与待测蛋白样品匹配之缓冲液进行倍比稀释：40μl4000μg/mlBSA+60μl稀释溶液=100μl,从中取出50μl连续倍比稀释，得到BSA标准溶液1600、800、400、200、100、50、25μg/ml,各50μl。　　、蛋白测定　　蛋白质浓度线性检测范围为10-XXμg/ml。微板测定用96孔板，反应终体积225μl，用酶标仪测定。　　a.微板测定：用加样器将25μl标准品与200μlWR工作液混合于微板孔中。b.37℃恒温反应30min。　　c.将反应管温度冷却至室温，测定562nm光密度值。　　d.绘制标准曲线。X轴为BSA标准蛋白浓度,轴为各标准管对应的OD值。绘制excel拟合曲线。　　3、实验结果　　、微板测定方案实验数据　　标号蛋白浓度标准蛋白体积WR工作试剂OD值OD值　　1025XXXXXXXX5XX5XX40025XX80025XX　　、　　根据两次测得的吸光度值分别绘制拟合曲线，分别为蛋白浓度　　–吸光度和蛋白浓度–吸光度。　　4、结果讨论　　PBS缓冲液的配制　　1、Na2HPO4：称取Na2HPO4-12H2O，溶于100ml水。NaH2PO4：称取NaH2PO4-H2O，溶于100ml水。　　2、各种浓度PB:　　先配PB:取19ml/L的NaH2PO4，81ml/L的Na2HPO4，测得溶液pH低于，滴NaOH至pH计测得pH=即可。然后，只需将PB按相应比例适当稀释即可，如：PB：取50mlPB,加水稀释至100ml即可。PB：取5mlPB,加水稀释至100ml即可。PB：取10mlPB,加水稀释至100ml即可。　　3、加入NaCl至%即可。　　生化大实验　　实验报告　　姓名：　　学号：　　专业：　　班级：　　实验班级：　　单位：　　指导老师：　　实验1多酚氧化酶的分离提取　　一、实验原理：　　多酚氧化酶(PPO)能够通过分子氧氧化酚或多酚形成对应的醌，它是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶，位于质体、微体内，可参与植物生长、分化、种皮透性及植物抗性的调节，属于末端氧化酶的一种。　　植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成为醌，使组织形成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。醌类物质对微生物有毒害作用，所以受伤组织一般这种酶的活性就会提高。另外，多酚氧化酶也可以与细胞内其他底物氧化相偶联，起到末端氧化酶的作用。　　蛋白质在不同浓度的盐溶液中的的溶解度不同，通过向溶液中加入适量的固体硫酸铵来调节粗提液的盐浓度从而可以将PPO蛋白从体系中析出，且大分子蛋白质不能通过透析膜。　　二、实验目的：　　通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握相关的仪器设备的正确使用的方法，以及蛋白质的提取分离的系统技术。　　三、材料与试剂：　　1.材料：马铃薯　　2.试剂：磷酸缓冲液pH配制是配x10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵；磷酸缓冲液pH　　3.设备：试管与试管架；烧杯、玻璃棒；移液管、滴管等；试剂瓶；透析袋；过滤纱布；植物组织匀浆机；pH计和pH试纸；高速冷冻离心机；　　四、操作步骤：　　1.两小组共称取200g土豆削皮后切成小块，加入300ml缓冲液A，两者按1:1(