马氏珠母贝糖胺聚糖抗肿瘤活性及其机理研究-水产品加工及贮藏工程专业毕业论文.docxVIP

马氏珠母贝糖胺聚糖抗肿瘤活性及其机理研究摘要 马氏珠母贝糖胺聚糖抗肿瘤活性及其机理研究 摘要 目的：在已有的研究基础上，研究珠母贝糖胺聚糖(GAG)抗L1210白血病作用，探 讨其在抑制肿瘤血管生成、增强机体免疫力方面的抗肿瘤作用机理。 方法：1．双酶法提取珠母贝GAG粗品(CPG)，DEAE．52．纤维素柱分离纯化珠母 贝GAG，采用小鼠急性毒性实验检测CPG的毒性。2．采用体内外实验法探讨珠母贝 GAG的抗L12lo白血病作用。MTT法检测珠母贝GAG粗品(cPG)、纯化级分(GAG一1、 GAG．2)体外对L12lo细胞生长的抑制作用，并探讨CPG与化疗药顺铂(DDP)合用 时对L12lo细胞生长的抑制效果。建立移植性L12lo白血病荷瘤小鼠模型，检测CPG 对荷L1210白血病小鼠的生命延长率及腹围的影响，并初步探讨CPG和环磷酰胺(cY) 的协同抑瘤作用。3．以鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)为模型，检测CPG、GAG．1、GAG．2 对CAM血管生成的影响，并探讨CPG、GAG．1、GAG一2与5一氟尿嘧啶(5-FU)合 用时对CAM血管生成的抑制效果，以探讨珠母贝GAG抗肿瘤血管生成方面的抗肿 瘤作用机理。4．检测CPG对正常及免疫抑制小鼠脾指数、胸腺指数的影响，CPG、 GAG—l、GAG一2体外对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红及产生一氧化氮(No)能力的 影响，CPG、GAG一1、GAG一2体外对小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响，探讨珠母贝 GAG增强机体免疫力方面的抗肿瘤作用机理。 结果：1．本实验提取纯化的珠母贝糖胺聚糖各级分(CPG、GAG一1、GAG一2)主要 技术指标与本实验室前期研究结果基本一致，说明珠母贝GAG提取纯化技术成熟， 结果稳定。急性毒性实验结果显示，CPG对小鼠经口的半数致死量LDso21．509／kg，为 安全无毒。 2．CPG、GAG．1、GAG．2体外对L12lo细胞生长均有一定的抑制作用，其中GAG．1 效果最好，在250ug／ml剂量下作用24h，抑制率达51．7％(Po．01)。CPG和GAG．2 抑制效果相当，相同条件下，CPG、GAG-2的抑制率分别为31．4％(P0．01)、23．8％ (PO．05)。CPG与DDP合用能增强DDP对L1210细胞生长的抑制效果，100ug／ml 剂量的CPG与O．1ug／ml剂量的DDP共同作用24h能使DDP的抑制率从11．O％ (P0．05)升高到42．4％(Po．01)。CPG具有一定的延长荷L12Io白血病小鼠生命的 作用，其中100mg／kg剂量组小鼠的生命延长率为19．3％(Po．05)。腹围测定结果显 示，CPG不同剂量组的小鼠腹围均少于生理盐水对照组，但无统计学意义，其结果 与生命延长率有一定的相关性。另外实验结果还显示：30mg／kg剂量的CPG与环磷 酰胺(CY)合用并不能增强CY对L12lo白血病小鼠的生命延长作用。 3．CPG、GAG-l、GAG-2在实验所选剂量(O．5ug／ml、5ug／ml、50ug／ml、500ug／rra) 下，无明显的直接抑制CAM血管生成作用，但CPG、GAG．1、GAG-2在实验所选 I 剂量(5ug／ml、50ug／m1)下跟5一Fu(2．5ug／m1)合用时，均能显著增敏5-Fu的抑制 剂量(5ug／ml、50ug／m1)下跟5一Fu(2．5ug／m1)合用时，均能显著增敏5-Fu的抑制 CAM血管生成作用(P0．01)，并呈一定的剂量效应关系，其中GAG．1、GAG．2增 敏效果更显著。 4．CPG完全能对抗环磷酰胺(CY)引起的胸腺萎缩，对正常小鼠的胸腺亦有明 显的增重作用；CPG还能抗CY引起的脾萎缩，对正常小鼠的JIm-N无明显影响。CPG、 GAG—l在体外均能显著促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红和产生NO的能力(P0．01 或P0．05)，且具有剂量效应关系，相同剂量下，CPG对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性 红和产生NO的能力效果好于GAG．1。GAG-2对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红和产 生NO的能力无明显影响。CPG、GAG—l、GAG．2在体外均能直接促进小鼠脾淋巴 细胞增殖(p0．01)，并能协同ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖(p0．01)。 结论：珠母贝GAG有一定的抗L1210白血病作用。珠母贝GAG能显著增敏5一Fu抑 制CAM血管生成作用，其在体内增敏化疗药5。FU抗肿瘤作用机理之一可能是促进 了5．Fu抑制肿瘤血管的生成。珠母贝GAG具有增强免疫功能，其在体内抗肿瘤作 用机理之一是增强了机体免疫力。 关键词：马氏珠母贝，糖胺聚糖，抗L12lo白血病，抗肿瘤机理，抗血管，免疫增强 功能 II Research Research of anti-tumor act