黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠海马Alzheimer病样tau蛋白磷酸 化途径的影响及机制研究-中医内科学专业毕业论文.docx

成都中 成都中医药大学博士学位论文 万方数据 万方数据 中文摘要 2型糖尿病（T2DM）是以胰岛素抵抗和胰岛素分泌缺陷为病理特征的常见 代谢性疾病。随着糖尿病大小血管并发症的有效干预及治疗，患者的生存时间延 长，大脑成为糖代谢异常作用的又一靶器官，认知损害及痴呆也成为T2DM患者 新的晚期并发症。T2DM是阿尔茨海默病（AD）发病的高危风险因子，可能与 其异常胰岛素水平和紊乱的葡萄糖代谢有关，如何阻断或延缓T2DM发展为AD 的进程，已成为当今研究的重点和热点。本研究采用黄连解毒汤（HLJDD）为 治疗药物，以链脲佐菌素（STZ）诱导T2DM大鼠模型为研究载体，通过观察大 鼠学习记忆能力、脑组织形态学、PI3K-Akt/PKB信号通路以及葡萄糖代谢的变 化，探讨黄连解毒汤对T2DM并发AD的治疗作用及可能机制。 目的：通过建立 T2DM 大鼠模型，经 HLJDD 干预治疗后，观察 HLJDD 对 T2DM 大鼠海马 Alzheimer 病样 tau 蛋白磷酸化途径的影响，并探讨其可能发生机制。 方法：采用“4 周高糖高脂+2 次 STZ 腹腔注射”造模法制备 T2DM 大鼠模型， 给予 HLJDD 8 周干预治疗后，观察大鼠一般情况（精神活动、体重、12 小时进 食饮水量、血糖及胰岛素水平）及 HE 染色脑组织病理形态学改变；Western blot 观察大鼠海马总 tau 蛋白及 tau 蛋白上部分磷酸化位点（Ser199、Ser202、Thr231、 Ser396）磷酸化水平，Western blot 和免疫组化法检测 T2DM 大鼠 PI3K-Akt/PKB 信号通路上关键蛋白（胰岛素受体 α/β、Akt、GSK-3β）的表达；在 T2DM 模型 大鼠海马中定位注射氯化锂（LiCl）以抑制糖原合成激酶-3β（GSK-3β）活性， 给予 HLJDD 8 周干预治疗后，观察其一般情况，Western blot 和免疫组化法检测 LiCl 大鼠海马 GSK-3β，Western blot 检测总 tau 蛋白及 tau 蛋白上部分磷酸化位 点（Ser199、Ser202、Thr231、Ser396）磷酸化水平；Western blot 和免疫组化法 检测 T2DM 大鼠海马葡萄糖转运蛋白 3（GLUT3）和 tau 蛋白 O-GlcNAc 糖基化 水平。 结果： 1. HLJDD 对大鼠一般情况的影响 ①空白组大鼠精神状态良好，体重逐渐增加，进食饮水平稳；模型组大鼠表 现出精神萎靡不振，倦怠少动，进食饮水量较空白组增加，小便量多，体重减轻； - 1 - 各给药组大鼠精神状态较模型组大鼠为好，进食饮水量略低于模型组，但均高于 空白组。 ②与空白组比较，模型组大鼠空腹胰岛素、空腹血糖、胰岛素抵抗指数以及 随机血糖明显升高（P﹤0.01）。与模型组比较，各治疗组大鼠空腹胰岛素水平、 空腹血糖和胰岛素抵抗指数明显降低（P﹤0.01），黄连解毒汤各剂量组之间比较 无显著差异。各治疗组大鼠随机血糖与模型组相比无显著差异。 2. HLJDD 对大鼠 Morris 水迷宫行为学的影响 ①定位航行实验：模型组大鼠平均逃避潜伏期较空白组显著延长（P0.01）； 各治疗组平均逃避潜伏期较模型组明显缩短（P0.05，P0.01）。②空间探索实 验：与空白组比较，模型组大鼠逃逸平台次数显著减少（P0.01），有效区停留 时间及有效区游泳路程均明显缩短（P0.05，P0.01）。与模型组比较，各治疗 组逃逸平台次数显著增加（P0.01），组间比较无统计学差异。除 L-HLJDD 组外， 其他治疗组大鼠在有效区停留时间较模型组延长（P0.05），各治疗组大鼠在有 效区游泳路程，较模型组延长（P0.05，P0.01）。 3. HLJDD 对大鼠脑组织 HE 染色的影响 空白组大鼠海马区细胞带完整，锥体细胞数量多、体积大，胞膜完整，排列 整齐；胞核大而圆，核膜完整，核仁明显。模型组大鼠海马区锥体细胞层数减少， 排列稀疏、紊乱，细胞带不完整；神经元数量较正常对照组明显减少，可见较多 呈固缩状坏死神经元；剩余神经元多见细胞肿胀，胞核染色浅，呈空泡状；细胞 带附近多见胶质细胞浸润及噬神经元现象，部分细胞带附近出现大量空泡区域。 经 HLJDD 治疗后上述病理改变明显减轻。 4. HLJDD 对大鼠海马 tau 蛋白磷酸化的影响 Western blot 检测各组大鼠海马组织中 tau-5 表达无显著差异；模型组大鼠海 马 tau 蛋白在位点 Ser199、Ser202、Thr231、Ser396 上磷酸化的程度均明显高于 空白组（P0.05，P0.01）；与模型组相比，M-HLJDD 组的 PT231 外，各治疗 组大鼠海马 PS199、PS202、PT231、PS